Metody pro mikroskopické vyšetření mikroorganismů

Video: Microbiology. Příprava pevné přípravky (E. Zvonaryova)

Nejmenší velikost mikroorganismy jsou odpovědné za použití bakterií ke studiu morfologie přesných optických přístrojů - mikroskopů. Nejčastěji se používá světlé pole mikroskopie, temné pole mikroskopie, fázový kontrast a fluorescenční mikroskopie. Pro speciální mikrobiologických studií využívajících elektronové mikroskopie.

světlé pole mikroskopie

Jasné pole mikroskopie se provádí s použitím běžného světelného mikroskopu, hlavní část, která je čočka. Na okraji čočky označený zvětšení: 8, 10, 20, 40, 90.

Ve studii mikrobů používaných ponoření systém (čočky). Ponoření čočka ponoří do poklesu cedrového oleje, aplikované na léčivo. Cedrový olej má stejný index lomu jako sklo, a to je dosaženo nejmenší rozptyl světelných paprsků (obr. 1.12).

Obr. 1.12. paprsky předmětu v ponorné čočky

Obraz získaný čočkou zvyšuje okulár, sestávající ze dvou čoček. V domácích mikroskopů okuláry jsou používány s rostoucí 7, 10, 15 (obr. 1.13). Celkové zvětšení mikroskopu je dána součinem čočky pro zvýšení zvětšení okuláru. V mikrobiologii se obvykle používá ke zvýšení na 900-1000 časy. Kvalita mikroskopu není závislá na míře růstu, ale na jeho rozlišení.

Obr. 1.13. Schéma komplexního světelného mikroskopu pro pozorování v jasném poli, upravena pro osvětlení Koehler

Tím musíme pochopit, nejkratší vzdálenost mezi dvěma body je přípravek, ve kterém jsou jasně rozeznatelné pod mikroskopem. Rozlišení běžných světelných mikroskopů s ponorným systému je 0,2 um.

mikroskopie v temném poli

Mikroskopie v tmavém poli pohledu je založen na následujícím principu (obr. 1.14). Paprsky osvětlují objekt není dno a boční a nespadají do oka pozorovatele: zorné pole zůstává tmavé a objekt je osvětlen na jejím pozadí. Toho se dosáhne speciálním chladiči (paraboloidu) nebo konvenční chladičem, na které se vztahuje na středu kruhu černého papíru.

Obr. 1.14. Řidičské mikroskop pro pozorování v tmavém poli.

Přípravy na mikroskopie v temném poli se připravuje na typu „visí“ a „rozdrtil“ drop. Při přípravě léčiva „drcený“ pokles zkušební materiál (bakteriální kultury ve fyziologickém roztoku), se nanese na podložní sklíčko, který je potažen krycím sklem. Drop materiál vyplňuje celý prostor mezi krytem a šoupátka k vytvoření rovnoměrné vrstvy. Pro přípravu „visí“ kapky nutné použít speciální sklíčka s vybráním ve středu a krycích skel.

Ve středu krycí sklíčko potažené zkoušeného materiálu. Okraje drážek na podložní sklíčko potřísněné vazelínou, a že se vztahuje na krycí sklo tak, aby byl pokles proti prohloubení centrum. Pak obráceného přípravu sklíčkem nahoru. Darkfield mikroskopii se používá ke studiu živých organismů bez nátěru.

Fázově kontrastní mikroskopie

Při průchodu světelného paprsku přes achromatický objektu mění pouze výkyvy fázové světelné vlny, který není vnímán lidským okem. Dokud se obraz je kontrast, je nutné transformovat fázovou změnou v oblasti viditelného světla amplituda vln. Toho je dosaženo s fázovým kontrastem kondenzátorové čočky a fáze (obr. 1.15).

Obr. 1.15. Schéma mikroskopu s fázovým kontrastem.

Fázového kontrastu kondenzátor je konvenční čočka s revolverem a sada prstencových membrán pro každou čočku. Fáze čočka má fáze, deska, která se získá použitím vzácných zemin soli na objektivu. Obrázek prstencová clona kroužek se shoduje s fází odpovídající objektivní desky.

Mikroskopie s kontrastními fázemi značně zvyšuje kontrast v objektu, a používá se pro studium nativních preparátů.

fluorescenční mikroskopie

Fluorescenční mikroskopie je založena na schopnosti některých látek pod vlivem dopadajícího světla ozařováním svazkem na straně druhé (obvykle větší) vlnovou délkou (fluoreskují). Tyto látky se nazývají fluorochromem (akridin žlutá, rhodamin, atd.). Objekt ošetřené fluorochromem ultrafialovým světlem dostane světlou barvu na tmavém zorném poli.

Hlavní část fluorescenčního mikroskopu je iluminátor s lampu a ultrafialové barvy filtračního systému k ní (obr. 1.16). Je důležité použít nefluorescenční imerzní olej.
Fluorescenční mikroskopie se používá v praktických mikrobiologii pro indikaci a identifikace infekčních agens.

Obr. 1.16. Schematické znázornění fluorescenčním mikroskopu: 1-2 oblouk lampa- - Quartz kolektorů 3 - kyveta naplněna roztokem medi- síranu 4 - čelní kollektora- 5 - UV filtr 6 - 7 prizma- - deska uran stekla- 8 - oční filtru poutavý
ultrafialové paprsky.

elektronová mikroskopie

Funkce optické mikroskopy omezena příliš velkou vlnovou délkou viditelného světla (6000 A). Objekty, které jsou menší než tato hodnota jsou mimo řešení světelného mikroskopu. V elektronovém mikroskopu, namísto světelných vln pomocí elektronových paprsků, které mají extrémně krátkou vlnovou délku a vysoké rozlišení (obr. 1.17).

Obr. 1.17. Schéma transmisní elektronový mikroskop.

Jako zdroj elektronového svazku elektronové trysky používané, je bází wolframový drát zahříván elektrickým proudem. Mezi wolframem a anodou v dráze elektronů je elektrické pole s vysokým napětím. Elektronový paprsek způsobuje záři obrazovky fosforeskující. Procházející objektu, jehož části mají různou tloušťku, elektrony se ke zpoždění, které se projeví na sítových částí ztmavnutí. Objekt získává kontrast.

Formulace připravené pro elektronovou mikroskopii v nejlepších koloidních vrstev byla zkoumána po sušení předmětů ( „nativní léky“), rozprašováním pomocí těžkých kovů, ultratenké části způsobu replik a další.

Elektronová mikroskopie může objevit nejmenší struktury za účelem dosažení zvýšení až do výše 200 000, nebo viz velikost objekty 0,002 mikronů.

LV Timoshenko, MV Chubik

Sdílet na sociálních sítích:

Podobné