Mikrobiologická metoda pro laboratorní diagnostiky infekčních chorob

Po obdržení výsledků kontroly a při zohlednění epidemiologických dat stanovené konečná diagnóza. V diagnostice ukazují nozologická forma šifrovací ICD-10, způsob potvrzení diagnózy, závažnosti a průběhu onemocnění, stádia onemocnění, přítomnost doprovodných onemocnění a komplikace, jako je například „tyfu (krevní kultury), závažnosti onemocnění, doba razgara- komplikace - střevní krovotechenie- doprovodná onemocnění - diabetes ". Jak je přesná a přesná diagnostika určuje terapeutickou strategii.

V některých případech, kdy jsou nedostatečné klinické údaje a laboratorní testy neumožňují stanovit etiologie onemocnění, může být staging syndromový diagnózu (např otrava jídlem, akutní respirační onemocnění, SARS).

Laboratorní studie hrají důležitou roli v diagnostice infekčních nemocí, jmenování kauzální léčba, provádění monitorování účinnosti léčby. proces specifické laboratorní diagnostika Je založen na identifikaci patogenů a reakce lidského těla v průběhu infekčního procesu. Skládá se ze tří etap: sběr materiálu, dopravu a výzkum v laboratoři. Při provádění každé fázi uvádění specifických požadavků na plnění, který určuje účinnost laboratorní diagnostiky. Úkolem lékaře správná volba metody výzkumu a správné vyhodnocení jeho výsledků.

Laboratorní Diagnostické metody se liší citlivost a specifičnost. Citlivost metody odráží pravděpodobnost, že je výsledek testu pozitivní, infikovaného pacienta a je určen poměrem celkového počtu pozitivních výsledků na celkovém počtu infikovaných pacientů. Čím vyšší je citlivost, tím menší je pravděpodobnost, že falešně negativních výsledků. Kritérium specificity odráží pravděpodobnost, že výsledek testu bude pozitivní v neinfikovaných pacientů, a je vypočtena jako poměr celkového počtu negativních důsledků na celkovém počtu non-infikovaných pacientů. Čím méně specifické, tím větší je pravděpodobnost, že falešně pozitivních výsledků. Obě hodnoty jsou vyjádřeny v procentech.

Mikrobiologická diagnostická metoda založená na detekci patogenů v biologickém materiálu. Pomocí světelného optické a elektronové mikroskopie.

Mikrobiologické metody široce používané v diagnostice infekčních onemocnění bakteriálního, protozoální etiologie a vzácně, virových onemocnění.

V praxi bakteriologické laboratoře mikroskopické vyšetření Ve většině případů má hodnotu indikativní rychlou diagnózu. Hlavními úkoly jsou mikroskopie detekce patogenu v klinických vzorcích, přibližná identifikace na základě stanovení charakteristických znaků morfologických a barvivost bakterií, a zkoumání obarvený roztěr čistých kultur z kolonií.

Materiál pro mikroskopické vyšetření může být krev, kostní dřeň, mozkomíšní mok, tečkované lymfatických uzlin, výkaly, dvanáctníku a žluč, moč, sputum, sekrety z urogenitálního traktu, tkáňové biopsie, stěry z sliznici úst, mandle, nosní a další.

Pro detekci „krevní parazity“, např. Protozoí (Plasmodium malárii, trypanosomes, Leishmania, Babesia) a hlístů (microfilaria), zkoušené drogy „tenký nátěr“ a / nebo „tlustý“ kapky krve.

Droga „tlusté kapky“ připravený dvěma způsoby:

Vyschnout „silný pokles“ by měl postupně do vzduchu bez ohřevu, pod jejich ochranou proti dřevokaznému hmyzu. barveny krevními produkty bez předchozího fixace Romanovský-Giemsa.

připravit tenký nátěr aby krevní otisk v blízkosti okraje snímku a potom úhel hrana 45 ° se přivádí k poklesu a broušené sklo po krvi šíří podél jeho okraje souvislý pohyb distribuci krve po povrchu snímku. Přípravek získaný fixovány a obarveny.

Míšní tekutina pro mikrobiologické vyšetření jsou přijímána ve sterilní zkumavce při lumbální punkce. Pro přípravu formulace pomocí sraženina spontánně nebo odstředěním.

Skvrny od dutiny ústní sliznice přijata na lačno nebo 2 hodiny po jídle sterilní vatový tampon, rozmazání otisk se připravuje na sklíčko. Je-li poslední filmový materiál odstraní sterilní pinzetou. Materiál z nosní dutiny pořízené sterilním vatovým tamponem, který se zavádí hluboko do nosní dutiny. NP tampon přijata zadneglotochnym sterilním tampónem zavádí jemně otvorem nosní do nosohltanu. Pro analýzu záškrtu prozkoumat film i hlenu z nosu a krku. Materiál z nosu a hltanu nabývat různých tamponů.

Moč se shromažďovala k mikroskopickému vyšetření ve sterilním kontejneru po pečlivém WC vnějších genitálií. Pro přípravu formulace za použití sedimentu moči.

mikroskopické vyšetření podrobí nativní (ne-pevné, unstained) a obarvené přípravky. V prvním případě ukazují živých mikroorganizmů v produktu „visící kapky“ nebo „kapky“ drcené vyhodnocením motility a morfologické vlastnosti původce. Například, temné pole mikroskopie nativních přípravků používaných pro diagnostiku spirochetosis (primární syfilis, leptospiróze, epidemie (vshinogo) recidivující horečka), kandidózy nebo jiných houbových chorob. V těchto případech je výsledek mikroskopickým vyšetřením dává důvody pro stanovení diagnózy.

Mezi nejčastěji používané mikroorganismy v mikroskopii barevné stavu, zejména pro diagnostiku parazitárních onemocnění (malárie, amébová úplavice, giardiáza, leishmanióza, helmintóz). U barviv používaných pro reference, speciální a diferenciačních metod. Orientační zbarvení nám umožňuje odhadnout celkovou morfologii mikroorganismu. Pro tento účel lze použít standardní barvy - fuchsinem nebo methylenové modři.

Mezi konkrétní metody používané nejčastěji barvení podle Grama. Tato metoda ukazuje schopnost bakterií, který uchovává barviva krystalové violeti (nebo hořec fialové) nebo neodbarvuje v alkoholu. Gram-pozitivní bakterie jsou zbarveny fialové a Gram - červeně, protože odbarvení v alkoholu a dále obarveny purpurovou. Barvicí prostředky gram umožňuje definovat primární volby pomocí antibiotické terapie.

Speciální nátěrové metody zahrnují Ziehl-Nielsen, který zdůrazňuje, kyselých a alkohol hole, zejména Mycobacterium tuberculosis, které jsou zbarveny červeně, a zbývající mikroorganismy - v modré barvě.

rozlišování volání metody zbarvení jednotlivé prvky bakteriální buňky. Například barvení metahromatinovyh (volyutinovyh) inkluze v bakteriích (jako Neisseria, Mayer), barvicí kapsle (Giessen Leyfsonu Anthony), spóry, bičíky (od Leffler, Bailey, Gray a kol.), Buněčné stěny chromatin (jaderný) prvky (Romanowského-Giemsa a Pekarsky).

Od mikroskopické vyšetřovací metody zahrnují imunofluorescence (Fluorescenční mikroskopie) použity pro diagnostiku bakteriálních a virových infekcí, a na základě použití protilátek značených fluorescenčním barvivem.

Účinnost mikroskopické metody je určena jeho citlivost a specificitu. Specifičnost omezeny možné chybné identifikace činidla kvůli artefakty. Kromě toho, v průběhu mikroskopické vyšetření technika má hodnotu výzkumu je například v diagnostice malárie krve testuje citlivost metody „silná fólie“ 20-40 krát vyšší než ve studii tenký nátěr, protože tato droga umožňuje zobrazit větší objem krve, a navíc Plasmodium v ​​produktu jsou umístěny extracelulárně pro usnadnění jejich detekci a kvantifikaci.

Nicméně citlivost metody „silná fólie“, provedené standardy WHO (studie o alespoň 100 zorném poli po dobu nejméně 5 minut), ale není vyšší než 95% v důsledku nerovnoměrného rozložení krve malarických parazitů, zejména při nízkých úrovních parazitémie.

Důležitým způsobem, jak zvýšit citlivost metody je použití mikrobiologických metod různých koncentracích patogenů, jako je srážení nebo flotace vzorků stolice v průběhu studie, a filtrací přes filtr Millipore vzorky krve, moči, mozkomíšního moku.

Zlepšení účinnosti mikroskopické vyšetření odhalilo umožňuje kvantifikaci parazita v zorném poli nebo na jednotku objemu materiálu. Zejména, malárie (zejména při zjišťování R.Gakpragit) důležitou určující intenzitu parazitémie.

Kvantifikace mikroflóry v nátěru a identifikaci mikrobiální sdružení jsou důležité při určování, pokud je to nutné, etiologická role podmíněně patogenních mikroorganismů. Je známo, že maximální detekovatelná koncentrace bakterií ve stěru z nativního materiálu je 10  buněk v 1 ml. Pro většinu materiálu je považována za významnou etiologicky detekce oportunních bakterií konkrétního typu v koncentraci alespoň 10 -10  buněk v 1 ml, takže citlivost mikroskopické metody ve většině případů splňuje potřeby klinické mikrobiologie.

Yushchuk ND, Vengerov YY

Sdílet na sociálních sítích: