Techniky

Testování náčiní a zařízení pro odběr tělní tekutiny (Nechiporenko, 1999)

Algotest ke kvantifikaci biologické aktivity chemických sloučenin (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Příprava vzorků pro analýzu víceprvkové metodických pokynů Ruské federální Sanitární kontrolního střediska Muk 4.1.1483-03

metoda Formulace stanovení olova v krvi zředěním ICP-MS izotopu (Paschal et al., 1995)

Způsob víceprvková analýza krevních frakcích

sulfa Stanovení Sloučeniny (Prebsting a Gavrilova Timofeeva modifikace metody pro stanovení aktivity N-acetyltransferázy) (Pershyn 1971)

Testování náčiní a zařízení pro odběr tělní tekutiny (Nechiporenko, 1999)

Zkušební nádoby (zkumavky, zkumavky), injekční stříkačky typu „motýlí“ systémy (plastové stříkačky a zkumavky).

1. Rozpouštědlo: směs 1% HNO₃ a 0,001% Triton X-100. Připraví se za použití destilované vody. 10 ml kyseliny dusičné₃ (Reagent grade) se přidá k 500 ml čisté vody v odměrné baňce 1 litr. Potom se přidá 1 ml Triton X-100. Po rozpuštění se objem směsi se upraví na 1 litr.

2. Pro testování plastových injekčních stříkaček, kontejnery, kapiláry uvnitř objektu je vyrobena a 1 ml rozpouštědla, je přeneseno na testovací zkumavky. V případě, že se roztok udržuje uvnitř nádoby obráceného pro krycí nebo zásuvky pro 12-14 hodin. V případě zkušebních kovových jehel procházejí 1 ml roztoku. Pak všechny analyty individuálně testovány na obsah kovů.

3. Všechny výpočty byly provedeny na 1 ml roztoku. Celkový obsah celkového kovu ve všech zařízeních by neměl překročit 5% průměrného ekvivalentního vypočtené úrovně obsahu kovu v biologickém vzorku.

Algotest ke kvantifikaci biologické aktivity chemických sloučenin (Barashkov, Kiristaeva 1977)

V certifikátu níže popsané vynálezce № 557098. získané v algotest 1977 g. I když technicky, tato metoda není příliš složitá, je nutné splnit několik podmínek, zejména s cílem zajistit přítomnost lyuminostata (Continuous zářivkové osvětlení zářivky s intenzitou 3700 J / cm² sec, inkubační teplota 29 ± 3 ° C) a mají zkušenosti s řasami.

Test mezofilní organismem je kmen zelených řas Chlorella pyrenoidosa 82 ze sbírky kaváren. MSU mikrobiologie. Pěstuje se 3 dny za stálého světla, žárovka s intenzitou ze dne 10. ledna⁵ erg / cm² s pro 28 ° C plně Tamiya prostředí močovina a dodal: mikroelementy v Arnon-4 roztoku.

Před experimentem řasy buněk (mid-log fázi růstu) je oddělena od média centrifugací (3 tys.ob / min, 1200g, 5 min), promyta 0,01% sodné soli NaCl a zředěný 5 krát Předpoklad-1 média s pH asi 7,0, je zcela bez organických přísad.

Optimální koncentrace řas buněk pro maximální citlivost (květen 10⁵ - 10.dubna⁶/ Ml), což odpovídá 15-40 jednotek „index silikagelu“ (SP), který se rovná hmotnosti suspenze v CSC pyrogenního oxidu křemičitého mg / ml se stejným optické hustoty při 578 nm jsou řasy suspenze.

Při hodnocení toxicity látek nebo jejich směsí, jsou možné varianty týkající se rozpustnosti testovaných látek. Ve vodě rozpustné látky se zavádí do suspenze v koncentracích, které se liší o jeden řád, například, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. Ve vodě nerozpustné látky ve sverhrastvoritele podávána, například dimethylsulfoxidu (DMSO) nebo dimethylformamidu (DMF). Koncentrace Sverhrastvoriteley by neměl v důsledku jejich inherentní toxicity vyšší než 3%.

Vařené experimentální a kontrolní se stejným počátečním kejdy SP₍₁ vlije se do 2025 ml se širokým hrdlem baňkách nebo Erlenmey-EPA (50-100 ml), nebo ve standardních zkumavek do stojanů transparentních, uzavřená bavlny a inkubovány při 85-95 lyuminostate hodinu. Technicky pohodlné a vyhovující pro statistické zpracování opakovat každé možnosti 5-násobně.

Po inkubaci baňky (nebo trubky) se umístí v lázni z ultrazvukové čističky a zpracovává ultrazvukem za 10-15 sekund se 100 W, čímž se získá homogenní suspenze. Definují JV zkušenost a ovládání (JV_K) Pomocí absorbance při 578 nm (nebo počet buněk). Výpočty provedené podle vzorce:

kde% T₂ - procentuální změna kultury zdvojnásobení doby. Pozitivní výsledek ukazuje na přítomnost zakrnělý růst a toxický účinek, negativní - stimulační účinek.

Kritická koncentrace (C_cr) Jsou graficky. Osa pořadnic představuje vypočtené hodnoty% T₂ (Nad 0 - pozitivní, nižší - negativní) a na ose x - koncentrace zkoušené látky na logaritmické stupnici. Umístěte průsečík úsečky mezi body s větší a menší hodnoty% T₂ 5% hladině, rovnoběžně s osou úsečkových udává hodnota K_cr- 5% je přijímán jako kritickou úroveň vzhledem k tomu, že některé látky, nezpůsobují jasný stimulační účinek, a snížit pod 5 zvyšuje relativní chyby při stanovení.

Velmi vhodné vyjádření Výsledkem je, kromě K_cr, Příklad výpočtu toxicity vzhledem k toxicitě síranu měďnatého na „Tox“ (T_s), Identifikovaný v téže série pokusů: T_s = K^s_cr/ K_cr. Volba jako standard modelu toxicity CuSO₄ vzhledem k tomu, že tento materiál splňuje tyto dva požadavky: 1), že je nejvíce jako model fluoru a 2) poskytuje jasnou hodnota K^s_cr minimální rozdíl mezi toxickými a stimulujících koncentracích.

POTE: Od jevů selektivní toxicita, to znamená, že univerzální testovací organismy neexistují. Známých testů, jako je test s dafnie, na základě stanovení LD₅₀, že prakticky umožňuje nastavit kritickou koncentraci zkoušené látky, tj vyššího organismu, která je nezbytná činnost inhibována. Kromě toho, že zkušebním organismem pro experimenty by měly být ve standardním fyziologickém stavu v každém ročním období. Tento požadavek je nejvhodnější pro jednobuněčné zelené řasy.

Použití mezofilních kmenů Chlorelly umožňuje zvýšení citlivosti biotestu ve srovnání s jakoukoli jinou o více než o dva řády, velmi jednoduchým způsobem. Pre-kmen pěstuje v úplném médiu s močovinou, který je mezotrofní. Buňky byly potom promyty bez média a přesunuta do chudé autotrophic podmínky, že se podrobí dvojité fyziologické šoku.

Potřeba zavést vnitřní standard toxicity vychází z neschopnosti provádět experimenty v různých ročních obdobích za stejných podmínek. K^s_cr To se liší od experimentu experimentovat, ale ve většině případů je přibližně 3 mg CuSO₄/ L.

Příprava vzorků pro analýzu víceprvkové metodických pokynů Ruské federální Sanitární kontrolního střediska Muk 4.1.1483-03

Pro přípravu vzorku pomocí ICP-MS, které mají být použity nádobí fotoplastikovou důkladně promyty v ultrazvukové lázni zředěné 1: 1 HNO₃ a promyje se třikrát deionizovanou H₂O.

Výběr, skladování a příprava vzorků

vlasy připnout k zadní části hlavy ve výši >0,1 g, se nechá reagovat s acetonem po dobu 10-15 minut, promyty 3-krát deionizovanou H₂ach.

nehty řezat oběma rukama a zpracovány stejným způsobem. Oba objekty jsou uloženy v papírových obálek.

krevní od ulnární žíly v množství >1 ml uložené v ledničce po dobu 3-5 dnů nebo v mrazáku (18 ° C) nebo lyofilizuje. Pro dlouhodobé skladování se vzorky se umístí do jednorázových polypropylenových zkumavkách s pevnými víčky.

Podobně, zpracuje krev pro přípravu léčiv balené červené krvinky, plazma a sera, a vzorek mléko, sperma, lymfa, sliny.

moč (Ráno nebo denně) v množství, které není menší než 5 ml se umístí do uzavřené plastové nádobě v ledničce po dobu až 3 dnů, nebo zmrazené.

biopsie sval, kůže, epiteliální, játra, a další. bezprostředně po přípravě se zváží, umístí do utěsněné plastové misky a ponechá se v chladničce po dobu 3-5 dnů nebo ve zmrazeném stavu.

Vzorky kostí a zubů byl umístěn v plastovém obalu z laboratoře.

přípravky aminokyseliny, multivitaminů, BAS a suroviny pro jejich výrobu je v výrobce balíčku. Minimální hmotnost 10 g pevných přípravků, kapaliny - 100 ml.

Otevřená rozklad vzorků

Vlasy, nehty a další. Pevné vzorky. Část vzorku umístí do válce teflonové bylo přidáno 0,2-1,0 ml koncentrovaného HNO₃, ochranný kryt laboratorní fólie a umístí se do termobloku na 0,5-1,0 hodin při teplotě 115 ° C až do úplného rozpuštění. Rozpuštěný vzorek se kvantitativně převede do měřicí trubici a promývání vodou se upraví na objem 10 ml, pak - na analýzu.

Video: Max OT. tréninkové metody

kapalné vzorky. Přesně odvážené vzorky (0,1 až 0,5 ml) se umístí do válce z teflonu, stanovením hmotnosti zkumavek rozdíl hmotnosti před a po přípravě vzorku. Byl přidán 0.3-1.0 ml koncentrovaného HNO₃ a homogenizovaný vzorek, jak je popsáno výše.

Aby se zabránilo ukládání proteinů a kompenzaci pro vzorky s vysokou viskositou nemá jednoduché zředění vzorku s deionizovanou vodou s následným okyselením faktorem ředění alespoň 1: 100.

mikrovlnný rozklad

Přesně zvážený vzorek se umístí do teflonové vložce, 5 ml HNO₃ a dát do mikrovlnné trouby. Rozklad se provádí u výrobce programu (obvykle 5 minut při teplotě 200"C) se kvantitativně převede do zkumavky a objem byl upraven vodou na 10 ml. Vzorek o objemu 1 ml se upraví na objem 10 ml 0,5% HNO₃ a analyzován.

Nemá přímý výběr alikvotu rozkládá objemu vzorku 0,1-0,5 ml. Pro kompenzaci chyby před rozkladem zředěním vzorku zavedeného jako vnitřní standard (V, Rh) Ke koncentraci analytu v konečném roztoku byla asi 10 g / l. Roztok vnitřního standardu by měl být přidán do všech jednotlivých a kalibračních roztoků.

Korekce izobara překrývání, polyfunkčních překryvy a hluku z dopravy

Interference techniky ladění detekované stanovením standardní sčítání a měření sériově zředěné série vzorků.

oprava isobaric Překryvy generovány automaticky v souladu s softwarové balíky nástrojů pro ICP-MS. Přesné korekční koeficienty stanoví experimentálně.

oprava vícemocné překryvy vyžaduje pozornost obsluhy k odstranění rušení. Zařízení se reakční buňky se odstraní většinu polyatomic překrytí v zásadě. Specifické metody pro různá provedení ručně odstranit rušení jsou známé a jsou uvedeny v příslušných pokynů na stávající zařízení.

hluk z dopravy opravou maximální možné ředění a pozadí kyselinu normalizace. Použití vnitřního standardu eliminuje chyby vzorků ředění a obsahují mnoho účinku matrice na plazmové a iontové toku.

Kalibrace nástroje, měření, analýza měření a řízení vnitřní operační řízení popsány v příslušných návodu k přístroji. výrobci zařízení, aby provedla odpovídající odbornou přípravu pro provozovatele v rámci smluv na dodávky zařízení.

metoda Formulace stanovení olova v krvi zředěním ICP-MS izotopu (Paschal et al., 1995)

Přesně zvážený vzorek celé krve dvou 0,5 U jednoho přidáno přibližně 100 mg roztoku (přibližně 100 mikrolitrů) SRM 983 standardu, který obsahuje 92.15 at.% ²⁰⁶Pb na konečnou koncentraci přibližně 1 mg Pb/ G. Ve dvou podílech se přidá ke 2 ml koncentrovaného ultračisté HNO₃ a vypálit v mikrovlnné troubě v vážených PTFE plavidel.

Zbytky se ochladí, převede se do 15 ml zkumavky a zředí se vodou na 10 ml. Podíly se analyzují ICP-MS a stanovení poměru ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. soustředění Pb v původním vzorku se vypočte podle vzorce:

kde [Pb] - koncentrace Pb v neznámém vzorku v ng / g,

K - poměr relativní atomové hmotnosti přírodního Pb k relativní atomové hmotnosti Pb ve vzorku se přidá ²⁰⁶Pb (A_r = 206,063)

C_s - koncentrace Pb ve vzorku se přidá ²⁰⁶Pb v ng / g,

m_sp - hmotnost (g) se přidá roztok ²⁰⁶Pb,

m_sm - hmotnost (g) z původního vzorku,

0,0125 - relativní obsah ²⁰⁸Pb ve vzorku s přidaným SRM 983

0.921497 - relativní obsah ²⁰⁶Pb ve stejném roztoku,

208/206 (y) - poměr v přidaném roztoku

₂₀₆ a a₂₀₈ - přirozený obsah ²⁰⁶Pb a ²⁰⁸Pb v původním vzorku.

Způsob víceprvková analýza krevních frakcích

pro plazma typicky ve standardní konstrukce plastové trubky patřící do antikoagulační (heparin-Na nebo -Li sůl, K₂-EDTA Trilon B = 9NC citrátu, oxalát) Získejte vzorek krve. Buňky by měly být odděleny co nejdříve centrifugací, jak krátkodobého účinku heparinu a antikoagulační významně změnit základní složení séra. Pro dlouhodobé skladování vzorků krve v chladničce je dojít nevyhnutelný proces hemolýzy, a v mrazničce krvinek jsou zničeny.

pro sera aby vzorek krve koagulovat ( „Curl“), po které se fibrinové sraženina se oddělí spolu s buňkami. Chcete-li získat bez proteinů filtrát (BBF), pak se na 1 díl krve přidá 9 dílů 5% TCA (TCA). Proteinová sraženina se odstraní odstředěním (2 tis. Ot / min, 10 min). Pro určení prvků supernatantu byl použit.

0,5 ml krve nebo plazmy nebo séra se umístí se přidá 4,5 ml 30% nádobce pro mikrovlnné ozařování HNO₃. obsah mineralizovaná (Například v mikrovlnné troubě firmy Berghof Speedwave ™ MWS-2 program P₆ 3 krocích (25 minut)).

Mineralizovaná roztok se zředí 5% HNO₃ na objem 10 ml (ředění 20-krát) a použita pro stanovení ICP-MS.

poznámka: V případě výsledků z rozsahu pro jednotlivé prvky analytu zředěné. Všechna ředění v potaz při závěrečných minutách výsledků.

sulfa Stanovení sloučeniny (Prebsting a Gavrilova Timofeeva způsob modifikace pro stanovení aktivity N-acetyltransferázu) (Pershin, 1971)

činidla:

1) 15% kyseliny trichloroctové (TCA)

2) 0,5% roztok NaNO₂

3) nasycený roztok CH₃COONa (1 díl soli se rozpustí v 2,8 dílu H₂O)

4) 0,5% roztok acetylovaného H-kyseliny (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfonové kyseliny) (připravený v den pokusu)

5), 7-10% roztok HCl

6) Hlavním standardní roztok

10 mg sulfadimezin norsulfazola, umístěno do odměrné baňky o objemu 100 ml a 2,1 ml 0,1 N NaOH za účelem úplného rozpuštění sulfanilamidem. doplňovány destilovanou H₂O až ke značce, to znamená před koncentrace léčiva 100 ug v 1 ml roztoku. Tento roztok se skladuje v chladničce.

Kalibrační křivka byla zkonstruována za použití série řešení studovat užívané léky pro analýzu photoelectrocolorimeter (FEC) s modrým filtrem, například 10-8-6-4-2 ug / ml.

Předmět je dána 1-2 tablety sulfa léky, a shromáždí se denní moč. Trubice je naplněna bylo přidáno 0,2 ml moči 2 ml roztoku №1 + 1 № 5 ml a 6,8 ml destilované H₂O. Po míchání a filtraci 1 ml filtrátu odpovídá 0,02 ml moči.

Analýza volného sulfanilamidu. Ve zkumavce se nalije 2,5 ml filtrátu moče se nalije 0,1 ml roztoku № 2, směs se míchá a po 10 minutách se vlije 1,5 ml roztoku № 3 a znovu promísí. Ihned, 0,25 ml roztoku № 4. Poté, co se objeví promíchání růžové zabarvení. Po 15 minutách se intenzita se měří na FEC s modrým filtrem.

Pracovní standardy zpracované Tate stejný. Kalibrační křivky se vypočítá koncentrace volného léčiva s přihlédnutím ke všem ředění.

Analýza celkové sulfanilamidu. Po obdržení této drogy v těle subjektu acetylovaného N-acetyltransferáza. Tato část může být určena pouze po hydrolýze. Ve zkumavce se nalije 2,5 ml vzorku a 0,25 ml № 5. Podobně také pracovat se standardními roztoky. Trubka se směsí se umístí do vroucí vody po dobu 30 minut. Po ochlazení se objem kapaliny v trubici se upraví na 2,5 ml destilované H₂O. Další práce s řešením podle způsobu stanovení volného sulfanilamidem.

Kalibrační křivka konstruována s standardního pracovního roztoku po hydrolýze se vypočítá celkové množství léku (volný a acetylovaný) ve vzorku. Po odečtením množství volného léčiva získané v množství acetylovaného přípravy %%, vztaženo na celkovou.

Medical bioneorganika. GK ovce