Fyziologie mikroorganismů: vlastnosti kultury bakterií, izolace čistých kultur mikroorganismů

Kulturní vlastnosti bakterií

Do kultury (nebo macromorphological) vlastnosti zahrnují vlastnosti mikrobiálního růstu na pevných a kapalných živném médiu. Na povrchu pevných živných médií, v závislosti na plodině, mikroorganismy mohou růst jako kolonie, mrtvice nebo kontinuální trávníku.

Kolonie nazývá izolovaný shluk buněk jednoho druhu, které se pěstují z jediné buňky (klon). V závislosti na tom, kde roste, že mikroorganismus (na povrchu pevných živném médiu nebo v jeho silnější) rozlišují povrchu, hloubkou a spodní kolonie.

Kolonie pěstované na povrch média, jsou různé: jsou druhově specifické, a jejich studium se používá k určení specifické příslušenství kulturu v zkoumání.

Při popisu kolonie vzít v úvahu tyto prvky:
1) tvar Colony - kolo, améboidním, rizoidnaya, nesprávné, atd.;.

2) velikost (průměr), kolonie - velmi malé (bod) (0,1 do 0,5 mm), malý (0,5 do 3 mm), střední velikosti (3-5 mm) a velké (více než 5 mm v průměru );

3) Colony povrch - je hladký, hrubý, složený, vrásčitá, se soustřednými kruhy nebo radiálně pruhovaná;

4) Kolonie profil - ploché, konvexní, kuželovitý, crateriform atd.;.

5) transparentnost - matný, matný, lesklý, transparentní, prachový;

6) Barva kolonií (pigment) - bezbarvý nebo pigmentované (bílá, žlutá, zlatá, červená, černá), zdůrazňují výběr pigmentu v médiu s jeho zbarvení;

7) Kolonie hrana - hladký, vlnitý, zoubkovaný, lemované, atd.;.

8) Struktura kolonie - homogenní, jemného nebo hrubozrnný, struychataya- okraj a struktura kolonie se stanoví za použití lupy nebo mikroskopem při malém zvětšení jeho umístěním na Petriho misku s setí na mikroskopu fázi dolů víkem;

9) stanovení konzistence kolonii- dotykem smyčky: kolonie mohou být hustá, měkká, vrůstající do agaru, mukosální (pro smyčkových úseků), křehké (snadno zlomený při kontaktu s smyčky).

Hluboké kolonie často připomínají víceméně sloučené lenticely (forma v úpletu se špičatými konci), někdy kousky vlny s threadlike přídavky do kultivačního média. Tvorba hlubokých kolonií často doprovázeny rupturou hustém médiu, pokud mikroorganismy izolované plyn.

Spodní kolonie mají obvykle podobu tenké průhledné fólie, plíživý podél spodní části.

Funkce kolonie se může měnit s věkem, které jsou závislé na složení média a teploty kultury.

Růst mikroorganismů v kapalných médiích v úvahu, pomocí čtyř-sedmidenní kultury pěstované ve stacionárních podmínkách.

V tekutém médiu během růstu mikroorganismů je pozorován zákal média, tvorbu filmu nebo zbytek.

Když se pěstuje na polo (0,5-0,7% agaru) Živná půda mobilní mikroby způsobí výrazný zákal, stále tvoří jen růst v průběhu sázení píchnutí ve středu.

Často se mikrobiální růst je doprovázen zápach pigmentace střední uhličitého. Charakteristický zápach některých kultur bakterií spojené s tvorbou různých esterů (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo a kol.), Indol, merkaptan, sirovodíku, skatol, amoniak, kyselina máselná.

Schopnost tvořit pigmenty je vlastní mnoha typů mikroorganismů. Chemická povaha pigmentů různých: karotenoidy, antokyany, melaninu. Je-li pigment je nerozpustná ve vodě, barevné kultura nalet- pouze v případě, že je rozpustný, obarvený a živné médium. Má se za to, že pigmenty chrání bakterie před ničivým působením slunečního záření, takže vzduch, jak mnoho pigmentované bakterie, kromě toho, pigmenty se podílejí na metabolismu těchto mikroorganismů.

V přírodě existují tzv fosforeskující bakterie kultur, které svítí ve tmě zelenavě namodralé nebo nažloutlé světlo. Tyto bakterie se vyskytují především v řece nebo u moře. Pro luminiscenčních bakterií - photobacteria -otnosyatsya aerobních bakterií (Vibrio, koky, tyče).

Izolace čistých kultur mikroorganismů

Čistá kultura se nazývá kulturu, která obsahuje mikroorganismus druhu. Izolace čistých kultur bakterií -Required krok bakteriologického výzkumu v laboratoři, studovat různé mikrobiální kontaminaci životního prostředí, a obecně pro jakékoliv práci s mikroorganismy.

Zkušební materiál (voda, půda, vzduch, potraviny nebo jiné objekty) obvykle obsahuje zárodky asociaci.

Izolace čisté kultury nám umožňuje studovat morfologické, kulturní, biochemické, antigenní a další funkce, v závislosti na souhrnu, který je určen na druhy a typy členství patogenu, např. E. vytáhl identifikaci.

Pro izolaci čistých kultur mikroorganismů se používají techniky, které mohou být rozděleny do několika skupin:
1. Způsob Pasteur - sériové ředění zkoušené látky v kapalném živném prostředí na koncentraci jedné buňky, v množství (historický význam).

2. Způsob podle Koch ( „zapojení deska“) - sériové ředění testovaného materiálu v roztaveném agaru (teplota 48 až 50 ° C), a poté naplněním do Petriho misky, kde agar ztuhne. Setí značky, zpravidla tři nebo čtyři posledního ředění, kdy bakterie ubývá v budoucnu, s růstem Petriho misek objeví izolované kolonie jsou vytvořeny z jednoho z původní mateřské buňky. Z izolovaných kolonií v hloubce agaru jsou čisté kultury bakterií na čerstvé reseeding prostředí.

3. Způsob Shukevich - používá se pro získání čisté kultury Proteus a další mikroorganismy, které mají „plíživé“ růstu. Setí zkušební materiál pro vytvoření kondenzované vody na spodní straně sklonu. Pohyblivé bakterie (Proteus), jsou schopni chodit do šikmé kultury, stále zůstávají formy rostou na dně, v místě očkování. Subkultivace horní okraje kultury, je možné, aby se získala čistá kultura.

4. Způsob Drigalski - široce používané v bakteriologické praxi, testovaný materiál zředěn ve zkumavce se sterilním fyziologickým roztokem nebo vývaru. Jedna kapka z prvního materiálu se přivádí do šálku s sterilní skleněnou špachtlí a rozšířením přes celý povrch média. Potom se stejně špachtle (nehoří přes ni do plamene hořáku), aby se stejnou plodinu v druhé a třetí desky.

S každou inokulace bakterií na stěrky je stále méně a méně, a naneseny na třetí pohár, budou bakterie se rozdělí po povrchu kultivačního média odděleně od sebe navzájem. Po 1-7 dnů v inkubátoru udržování šálky (v závislosti na rychlosti růstu mikroorganismů) ve třetím šálku dává každé bakterie buněčného klonu izolované kolonie tvořící který dále pěstovány v šikmém agaru, aby se hromadit čistá kultura.

5. Způsob Weinberg. Zvláštní problémy vznikají při přidělování čistých kultur obligátně anaerobních mikroorganismů. V případě styku s molekulárním kyslíkem nezpůsobí okamžitou smrt buněk, plodinu produkovanou metodou Drygalski, ale pak se okamžitě umístí do šálku anaerobní. Nicméně, většina z nich je způsob chovu. Jeho podstata spočívá v tom, že ředění materiálu se provádí v roztaven a ochlazen na teplotu 45-50 ° agarového média.

Zkontrolujte, sériová ředění 6-10, pak se médium ve zkumavkách se rychle ochladí a vylije se povrchové vrstvy směsi parafinu a vazelínového oleje, aby se zabránilo vnikání vzduchu do vnitřku živné půdy. Někdy se kultivační médium po naočkování a v míchání se přenese do sterilní zkumavky nebo kapilární Burri Pasteurovy pipety, jejíž konce jsou uzavřeny. Pokud budou úspěšní chov v trubkách, trubky Burri, Pasteurovy pipety anaerobní růst izolovaných kolonií. Použít kultivační médium, objasnil, že izolované kolonie byly jasně viditelné.

Pro extrakci Izolované kolonie anaerobních trubice zahřáté mírně jej otáčí v plameni, agarem, přiléhající ke stěnám, a obsah zkumavky se taví agar sloupec vklouzne do sterilní Petriho misky. Sloupec agaru je řez sterilní pinzetou a vyjměte kolonie smyčku. Extrahované kolonie byly umístěny do kapalného média, příznivého pro rozvoj mikroorganismů přiděleny. Agarové médium foukané z trubice Burri, vedení plynu přes vrstvu vaty.

6. Způsob podle Hungate. Když se chtějí dostat izolované kolonie bakterií, obzvláště vysokou citlivostí na kyslík (přísné aerobních) s použitím způsobu rotujících Hungate trubek. Do tohoto roztaveného agaru naočkovaném bakterií při konstantním proudu skrz trubici inertního plynu se zbaví kyslíku nečistoty. Trubice se potom uzavře gumovým uzávěrem a vodorovně do svorky, rotační probirku- středu rovnoměrně rozděleny podél stěn trubky a tenkých vrstev ztuhne. Použití tenké vrstvy trubice naplněné směsí plynů umožňuje získání izolovaných kolonií jasně viditelné pouhým okem.

7. Izolace jednotlivých buněk pomocí mikromanipulátoru. Mikromanipulátor - zařízení, které umožňuje mikropipety nebo zvláštní mikropetli odstranění jedné buňky ze suspenze. Tato operace je kontrolován pod mikroskopem. Na fázi vlhké komoře mikroskopem určit, ve kterém léčivo je umístěn „visící kapky“. Držitelé provozní stativy pevné mikropipetou (mikropetli), jehož pohyb je v zorném poli mikroskopu vyrobené s mikronů přesnost díky systému šroubů a pák. Výzkumník pohledu do mikroskopu jednotlivé buňky mikropipety načte a přenáší je do zkumavek, obsahujících sterilní kapalné médium, čímž se získá klon buněk.

LV Timoshenko, MV Chubik

Sdílet na sociálních sítích:

Podobné