Lymfokinem aktivované zabíječské buňky pro imunizaci. Vliv lymfokiny aktivovaných NK buněk v přirozené imunity

IL-2 nebo exogenní analogy stimulovat proliferaci NK buněk a zvýšit jejich cytolytickou funkci, což vede k tvorbě tzv lymfokiny aktivovanou zabíječskou (LAK). Ze své podstaty, LAC jsou cytotoxické lymfocyty, které jsou schopné ničit buňky infikované viry nebo intracelulárními bakteriemi a nádorových buněk. V současné době je možnost léčby LAK studoval v různých formách rakoviny. Infekčních nemocí adoptivní transfer metoda LAC prakticky studovány.
toto otázkou My jsme studovali na infekce myší K. pneumoniae K2 CBA kultury kmene.

Lymfokiny aktivovanou zabíječskou ML připraveny ze slezin myší, když jsou kultivovány po dobu dvou dnů v médiu RPMI-1640 obsahujícího 1000 IU / ml IL2, byly buňky promyty a použity v experimentech.
studie Morfogistohimicheskie Ty ukázaly, že LAK buňky představují velký počet lymfoidních a typ immunoblast prolymphocytes s bazofilní cytoplazmy. Tyto skvrny se často nacházejí v buněčném dělení mitotický stav. Ve fázi kontrastní mikroskopie LAK buňky představují proliferující konglomeráty.

Tak, když Účinky IL-2 v MT sleziny myší došlo LAK generace, vyznačující se tím, proliferace a aktivace lymfoidních buněk. Zvýšená exprese aktivačních antigenů-onnyh tvořících znaky imunofenotypu LAC také svědčil aktivace lymfocytů procesy. Kromě toho jsme zjistili, že LAK měly signifikantně vyšší vrah aktivitu ve srovnání s intaktní ML ve vztahu k NK buněčná linie citlivá na myších lymfomu YAC-1.

Podle všeobecného přesvědčení, NK - hlavní subpopulaci lymfocytů exprimujících r75r receptoru řetězce IL-2 a selektivně aktivovány a proliferující pod jeho vlivem na tvořit LAC schopen efektivně lyžují cílových nádorových buněk. Nicméně, spolu s výše uvedenými myšlenkami, existuje důkaz o existenci populace v LAK NKT-buněk, které exprimují nejen NK (CD16, CD56) markerů, ale také diferenciaci T-buněčných antigenů (CD3, CD4, CD8).

tyto údaje vyhovět předchozí návrh NK-buňky, které jsou považovány nejen jako samostatný subpopulaci, ale také jako stupeň diferenciace zralých lymfocytů. Ze zralých lymfocytů inkubací s IL-2, mohou být připraveny tzv NK-buněk LAK.

v našem ML experimenty po kultivaci sleziny s IL-2 byly získány LAC expresi na jejich aktivační membrány molekuly (CD25), a molekuly hlavního histo-kompatibility komplex MHC I, MHC II. Ve stejné době, v populaci LAK kromě NK, přítomných exprimujících buněk a diferenciaci T-buněčných antigenů (CD3, CD4, CD8).

Nejnovější ve stejných množstvích byly detekovány v počáteční populaci ML. Použitá technologie získání lymfokiny aktivovanou zabíječskou To poskytuje podstatné zvýšení NK-buněk, s 1,5 až 20,3%, a buňky obsahující markerové molekuly CD25 a prezentaci antigenních MHC I a II.

Výsledný Suspenze lymfokiny aktivované zabíječi byla myším intraperitoneálně v 2,5 x 106 buněk v 0,5 ml 0,9% roztoku chloridu sodného. Poté, intraperitoneálně injikováno 250 buněk v objemu 0,5 ml K pneumoniae K2. Jako kontroly byly použity ML kultivovány v přítomnosti PHA (10 ug / ml).

Lymfokiny aktivovanou zabíječskou infikovaných K. pneumoniae (100 LD50) myš poskytuje 100% přežití zvířat v podstatě simultánní podání intraperitoneální mikrobiálních buněk a vrah. ML, PHA-aktivované, chráněná v 50% při 100% usmrcení intaktních myší, které dostaly infikování stejnou dávku.
Náš výzkum potvrdit Studie proveditelnosti na využití LAC pro adoptivní imunoterapii, jak je zaveden do myší intraperitoneálně LAC K. pneumoniae K2 brání rozvoji onemocnění u zvířat.

Při určování cytokin v kultivačním médiu byly zjištěny LAC zvýšený obsah IL-1 po 24 hodinách a 72 hodinách inkubace (254 + 12,3 pg / ml a 213 ± 11,5 pg / ml, v daném pořadí), po 72 hodinách - IL-6 (224 ± 21 2 pg / ml) a IL-10 (150 ± 10,5 pg / ml) ve srovnání s kulturou ml (obsah těchto cytokinů v kontrolách nepřesáhla 25 až 80 pg / ml) se inkubuje bez IL-2. Zajímavé, že v kultivačním médiu LAC nezvýšil obsah regulačního IL-12, který jsme ve značných množstvích určených do kultivačního media DK.

cytotoxická Aktivita lymfokiny aktivovanou zabíječskou, odvozený ze slezin myší (CBA) byla stanovena na NK-citlivé YAC-1 myší lymfom buněčné linie v obnovení test 3- (4,5-di-methylthiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT-test). Nádorové buňky (1 x 104 v 1 ml) byly inkubovány v kultivačním médiu s LAK v různých poměrech a pomocí absorbance při 540 nm bylo vypočteno procento lýzu nádorových buněk (procento cytotoxicity).
Kvalifikace vrah aktivitu efektorových buněk, ukázala, že LAC mají významně vyšší NK-aktivitu, ve srovnání s intaktní myší ML.

V poměru 1: 5 a LAK nádorové buňky Myší lymfom YAC-1 Cytotoxická aktivita NK buněk se zvýšil 6-krát oproti ML. Za těchto podmínek 15,5% ML lyžovány buněčné linie K562, zatímco za stejných podmínek LAC způsobil 92,2% smrt nádorových buněk (p < 0,01). В меньших соотношениях мишени/эффекторы (1:2 и 1:1) эти различия не столь значимы, хотя цитотоксическая активность ЛАК превышает таковую у МЛ интактных мышей.