Cytogenetická analýza choriových klků buněk placenty.

Buňky choriový vilózní (Placenta), k dispozici pro cytogenetickou analýzou, mají různý původ:
- cytotrophoblast buňky, diferenciace, které proiskhoditna morula fáze;
- mezenchymální buňky, že odlišit z vnitřní buněčné hmoty embrya do stádia blastocysty.

Video: Cytogenetické metody výzkumu

pro analýza chromozómu buňky choria nebo placenty s použitím dvou základních metod.

1. Dlouhodobá kultivace v jednovrstevné kultuře. Stejně jako v případě analýzy buněk AF, existuje velké množství modifikací kultivace choriových klků buňky. Pro více informací o nich může být v příslušné literatuře. Konstatujeme, že pouze rostoucí primární kultury jsou heterogenní buněčné kompozice s převažující růstem podobných fibroblastům mesenchymálních stromálních buněk klků. tvorba kolonií nebo uvolněné monovrstva se obvykle vyskytuje v 10 až do 12. dne kultivace. Základní principy kultur analýzy buněčné choriových klků a interpretaci výsledků jsou podobné těm z kultur buněk AF.

2. „Přímé“ drogy choriový klků. Metoda analýzy „přímé“ formulace na bázi prostředku studii spontánně štěpných cytotrophoblast buněk bez předchozí kultivace. První léky choriový vilózní tkáně obsahující metafázový talíř uspokojivé kvality, a to bez použití skupiny buněčné kultury byly získány Milanese výzkumníci v čele G. Simoiii. V následujících letech bylo navrženo různé modifikace tohoto způsobu, které zatragshzayut všechny fáze zpracování klků. V podstatě všechny varianty tohoto způsobu mohou být rozděleny do dvou skupin:
- skutečná „přímý“, založené na krátkodobé (2-3 hodin) před preinkubace nativní klků hypotonizaci a fixaci;
- "semidirect„Za předpokladu, že zvyšující se dobou inkubace nativního klků v kultivačním médiu s nutričních doplňků 24,48 nebo 72 hodin.

Navzdory zdánlivé jednoduchosti, Tyto metody zřídka poskytují konzistentní výsledky, a proto mají tendenci být použity ve spojení s kultivací. Typické nevýhody přímé metody popsané provedení jsou malé množství metafázových desek artefakt ztráta chromozomů během macerace vzorku v kyselině octové a malou vhodnosti chromozomů v diferenciální barvení referenční s barvivem Giemsa. Počítání mitóz na „přímých“ a „poloviční linie» přípravky ukázaly, že po inkubaci klků dobu 2 až 3 dnů, mitotická aktivita cytotrophoblast buněk je vyšší než při 2 nebo 24-hodinové inkubaci. To naznačuje, že v době biopsie buněk, dochází k „šoku“, který zasahuje do parametrů buněčného cyklu a vstupayutv mitózy.

jsme vyvinuli Vlastní metoda přímé modifikace - metoda „shake-off-imprintingu“ a rychlým způsobem dopředu. Použití velkých dávek kolchicinu při současném zpracování v hypotonickém roztoku umožňuje získat léky z CVS / placenty v těhotenství od 10 do 20ned které splňují všechna kritéria karyotypu. Ve spojení s fluorescenční metody diferenciální barvení chromozomů účinnosti těchto metod je více než 99%.

Video: Vision Cyto - Tradiční metody analýzy cytologických

Je třeba zdůraznit, že se jedná o vhodný pro modifikaci přípravky Food chromozomů z tkáně s vysokým mitotickým přirozenou aktivitou, včetně všech tkáních a orgánech embrya. Mezifázové jádra, ošetřené tímto způsobem, jsou velmi vhodné pro ryby, metody se specifickými sondami DNA, což je důležité při ověřování prenatální cytogenetické diagnostiky. Podrobné způsoby přípravy a diferenciální barvení provedeních popsaných výše.

vysoká účinnost, rychlost a spolehlivost s nejnižšími náklady za předpokladu, že rychlé zavedení těchto modifikací v různých prenatálních diagnostických center v Rusku a SNS.