Základní principy cytogenetického prenatální diagnostiky.

V současné době, problémové cytogenetická diagnostika v kterékoli fázi těhotenství je prakticky vyřešena. Vyvinul spolehlivé a účinné metody analýzy chromozomů fetálních buněk a embryonálních membrán. V závislosti na délce těhotenství a cílů studijní materiál pro analýzu chromozomů může sloužit buňky AF, chorion, placentární a fetální pupečníkové krve lymfocyty, získané nějakým způsobem invazinu. V našich nejčastěji používaných centrum choriona buněk (I termín), nebo placentální buňky (II) získá trimestr Transabdominální prostřednictvím horionbiopsii nebo platsentotsenteza. Chromozomální přípravky z placenty nebo choriové tkáně se připraví přímými nebo nepřímými metodami dříve popsaných podrobně v metodických doporučení a příslušné vedení.

Výhody a nevýhody cytogenetickou analýzou při použití různých metod získávání chromozomové preparáty z fetálních vzorků materiálu jsou uvedeny v tabulce.

Použít ve většině center komplex cytogenetický a molekulárně cytogenetické diagnostické metody poskytuje nejúplnější informace o fetálního karyotypu v různých fázích vývoje plodu.

Video: Cytogenetické studie. Biopsie choriových klků nezdařeného potratu

Když prenatální karyotyping To by se mělo řídit zásadami analýzy chromozomů léků mezinárodně uznávaných klinické cytogenetiky a schválených Ministerstvem zdravotnictví, jakož i pravidla mezinárodního názvosloví popisující carnotite.

Představuje analýzu cytogenetické buněk různé fetálního původu plodové vody buňky Buňky AF jsou reprezentovány několika typů různého původu:
- buňky amniotické membrány (vlastně amniocytů)
- fetální epitelové buňky (epidermis, gastrointestinální, urogenitální a dýchacích cest, dutiny ústní sliznice).

Video: Parent Club (25.11.2015 - Part 1)

Kvalitativní a kvantitativní složení Buňky AF, a koncentrace životaschopných buněk mají variabilitu a závisí na stupni vývoje. Optimální pro cytogenetické výzkumu je amniotické epitel - aktivně proliferující buněčný klon specifický pro dané kultury. Mezitím přesná identifikace typů buněk, které jsou schopné mitotické dělení a klonoobrazovaniyu za in vitro buněčné kultuře, velmi obtížné.

Nejčastěji se pro pěstování použité amniotické buňky získané v období 15-18 týdnů těhotenství. Použití pro tento účel amniocyty dříve (12-14 týdnů těhotenství) nebo vyšší (po 20 týdnech těhotenství) podmínek je v zásadě možné, ale zpravidla velmi komplikuje a prodlužuje diagnostického procesu, zvyšuje počet neúspěšných pokusů.

Standardní kultivaci buněk AF zahrnuje následující kroky: Nastavení kultury, subkultura, hypotonizaci a fixaci. Přes široce rozšířené použití buněčných kultur AF na světě, běžný způsob přípravy chromozomálních jsou neexistující. Pro kultivaci buněk AF použít dva hlavní přístupy, které se liší způsobem výroby kolonie a metody fixace.

Video: nová generace sekvenování: principy, možnosti a vyhlídky - Maria Logacheva

1. Baňka-metoda-buněčná kultura Pacienti v zavěšení a upevnění jednovrstevné kultuře po trypsinizací. Test se provádí ve dvou ze tří kultur (10 metafází na vzorek). Pokud jsou všechny metafázové destičky pozorován stejný karyotyp, je diagnóza stanovena. V případě jednoho metafázi s aberantní karyotyp (strukturní nebo numerické) byl analyzován záložní třetí kultury. Pokud je jeden a stejný chromozomální aberace určeno více než jeden metafázi z jedné láhve, ale není potvrzen v ostatních lahvích diagnóza „psevdomozaitsizm“. V případě stejných chromozomálních abnormalit ve více než jedné láhve, diagnóza je nastaveno „true mosaicismus“.

2. Způsob in situ - kultivace a fixace buněk na sklíčka v Petriho miskách nebo speciálních lahví - skluzavky. Analýza byla provedena na metafázových desky tří kultivačních misek (celkem 10 kolonií analyzovány). Při zjištění abnormální klon analyzován vsekultury. Chromozomální aberace pozorované v jediném šálku, označuje „psevdomozaitsizme“, více než jeden - „pravdivý mozaigshzme“.

Proces standardní kultivace amniocyty od obdržení vzorku až karyotypizaci trvá v průměru 14-21 dnů. Nevýhodou jsou vysoké náklady na kultivačního média a zařízení, což je důležité pro domácí laboratoře, stejně jako vysoká (až 2%), pravděpodobnost kontaminace vzorku mateřských buněk.

V posledních letech se vyvinul nový přístup k analýza chromozómu z kultivovaných buněk. «Pipett» Tato metoda je založena na izolaci mikromanipulyatsionnoy metafaznyhiprometafaznyhkletokiz nesuspenzionnyh úrodě ihmorfologicheskim rysy a slábnoucí vzhledem k podkladu. Dále hypotonizaci a fixace jsou prováděny na jednotlivé buňky. Tento způsob zkracuje období kultury na neskolkihdney a, co je nejdůležitější, snížení rizika diagnostických chyb způsobených jak mozaikou, a kontaminaci vzorku. Příprava prometafázi a metafázové destičky tímto způsobem může být jakéhokoli primárního a transplantovaných plodin. Bohužel, drahé vybavení a práce zabránit široké přijetí této progresivní metody v klinické praxi.