Endocrinology proteolytické enzymy vliv na metabolickou aktivitu mozkových buněk a neutrofilních leukocytů potkanů ​​albínů

Je známo, že proteolytické enzymy (trypsin, chymotrypsin, a další), v některých případech mají výrazný protivovospalitelnoedeystvie. V tomto ohledu, relativně proteasové enzymy shirokoispolzuyutsya při léčbě různých zánětlivých onemocnění skupiny: Bronchopulmonální, gynekologické, stomatologické, opuholevyhprotsessov (2,7,14), stejně jako v prevenci zánětu v chirurgii (6). Mezitím mechanismy profylaktické a terapeutické deystviyaproteoliticheskih fermentv zánětlivé procesy ostayutsyanedostatochno studoval. Většina plně osvětlené a role literatury argumentirovanav nekrózy a fibrinolytické (trombolytické) účinku proteáz v jejich protizánětlivý účinek (5,6). Nicméně v literatuře málo důkazů o přímém účinku proteáz na metabolicheskuyuaktivnost buňkách.

Práce byla zaměřena experimentální issledovanievliyaniya trypsin a kallikrein na aerobnogookisleniya enzymové aktivity v nervových buněk a makrofágů, které hrají vedoucí prevenci Rolv zánětu (gematoentsefalicheskiybarer).

Materiály a metody.

Experimenty byly prováděny na 61 bílé samci krys populace Vistarmassoy 200-250 g Dosažené 10 série pokusů: 6 řady - kontrola, který studoval dehydrogenázy v leykotsitahi systému neutrofilů "neuron-neuroglia" mozgaintaktnyh kůra zvířat intraperitoneální injekcí 0,85% sodíku rastvorahloristogo inaktivovaný trypsin a kallikrein (39krys) - řada 4 - experimentální, ve kterém degidrogenazneyrotsitov aktivita studována intraperitoneální injekcí aktivního trypsinu a kallikrein, stejně jako aktivitě dehydrogenáz a obsah glykogenu v neytrofilnyhleykotsitah krys intraperitoneální injekci testované aktivnyhfermentov (24 zvířat). Testované látky byly podávány od rascheta50 mikrogramů na 100 g hmotnosti zvířete. Studium metabolické nervnyhkletok kortexu neutrofilních leukocytů osuschestvlyalispustya krys 6 hodin po intraperitoneálním podání experimentů zkušební preparatov.Rezultaty jsou uvedeny v tabulkách N1 a N2.

Když histochemické studie objekt izucheniyasluzhil části mozku krysy, které bylo přijato v levém peredneytsentralnoy gyrus. Pro histochemickou analýzu byly připraveny kriostatnyesrezy 15 mikronů při -20^oC v mikrotome- kriostateMK-25 obvyklým způsobem [9]. Mozková kůra buňky mozgakrys laktátu byla zjištěna dehydrogenázy, postup glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9] a suktsinatdegidrogenazypo Nahlasa postup [8]. Aktivita dehydrogenáz posuzována pokontsentratsii formazanových granule v částech objektů. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili histochemického detekci aktivity na kryostatových řezech mozkové tkáně, která inkubirovaliv pracovní roztoky v nepřítomnosti specifického substratovokisleniya něm. Účtování histochemického reakce za použití dehydrogenase osuschestvlyalis cytophotometry při vlnové délce 512 nm, zonda0,1 cm průměr, čočky 40 [1]. Posouzení čistě chemické reakce otsenivaliv jednotky absorbance. Při stanovení aktivity neutrofilních granulocytů degidrogenazv krve bílých krys zkoumány aktivnostSDG [15], LDH a pro metodu TPD Hess et al., [8] modifikace navržené Borisova MA a kol. [3,4]. Cytochemické vyyavlenieglikogena v neutrofilních leukocytech byla provedena podle metody popsané v Hotchkiss-Shabadash [11,13]. Finální odhad cytochemické reakce osuschestvlyalipo princip Kaplow L. [14]. Polymorfonukleárních leukocytů v zavisimostiot stupeň aktivity enzymu byla klasifikována:
1 stupeň - v cytoplazmě jednotlivých pelet obsažených formazana.Aktivnost enzym zanedbatelný (obrázek 1a).
2 stupeň - formazan granule zabírají méně než polovina tsitoplazmykletok. Tato skupina zahrnuje buňky, které obsahují malé (prach) obsahuje nebo velmi světle zbarvený difuzní hmotnost (1b).
3 stupně - vyjádřeno inkluze leukocytů s reakčními produkty, které zabírají více než polovinu cytoplasmě neutrofilů (Fig.1c).
4 stupně - vyjádřeno buňky s vměstky reakčních produktů zabírat celou cytoplazmě neutrofilních leukocytů. Aktivnostfermenta vysoká (ris.1g). Výsledky výzkumu statistik obrabatyvalimetodami variace.

Výsledky a diskuse.

Intraperitoneální injekce krys způsobila zvýšení trypsinu ilikallikreina v neurocytes a buněk neyrogliibolshih hemisféry aktivity enzymu aerobnogookisleniya - LDH 27,2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Výsledky studie jsou uvedeny v tabulce obobschenyi. N1.
Účinek trypsinu a kallikreinu na dehydrogenázy, neuroglie sistemeneyrotsit mozkové kůry u krys in vivo (M +/- m).

Poznámka: čitatel - Aktivita degidrogenazv podmíněné obvyklé jednotky ve jmenovateli - změna indexu ve vztahu k řídicím protsentahpo. Pro sérii experimentů N3,4 - kontrola yavlyaetsyaseriya N2. Řada N5- série N3. Pro sérii N6 - N4 série. (*) - p < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Data-Porovnání histochemické issledovaniyameta parabolické činnost mozkových buněk a krevních belyhkrys studoval účinek proteáz identifikovaných stejné indikátory napravlennostizuchaemyh. Parenterální podání tripsinai kallikrein zvířat v dávce 50 mg na 100 g tělesné hmotnosti způsobené suschestvennyysdvig systém metabolismus a neuron-neuroglie a kůra golovnogomozga a neutrofilů vůči zvýšené aerobní oxidace vosstanovitelnyhprotsessov, jak je jasně prokázáno zvýšením aktivnostiSDG, klíčového enzymu při oxidativní fosforylace. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe akce krve trypsinem a kalikrein [12], lze předpokládat, že jsme identifikovali cytochemickými izmeneniyav buňky kůry mozkové hemisféry krysího obuslovlenybiologicheskim působení kininů, který pravděpodobně pronikayutcherez hematoencefalickou bariérou a stimulovat v nervových tkaniaerobnye redoxních procesů.

Snížená aktivita LDH, klíčový enzym aerobnogookislitelnogo enzymu v buňkách mozku a krevních belyhkrys působením trypsinu naznačuje, že tato fermentpri parenterální podávání inhibuje glykolýzu v buňkách se specificitou razlichnoyfunktsionalnoy.

Je známo, že ve srovnání s většinou drugihkletok těla ve všech leukocytech glykolytických prevraschenieuglevodov převažuje nad oxidační fosforylace. Udelnyyves glykolýza je celkem energeticheskihprotsessov [10] více než 60%.

Tabulka 2.
Změny aktivita dehydrogenázy a obsahu glykogenu v neytrofilnyhleykotsitah bílých krys za působení trypsinu a kallikreinu (M +/- m) - (v jednotkách aktivity Kaplow)

Poznámka: V každé sérii issledovaniyi použité kontrole 6 zvířat. Významnost rozdílů: p < 0,001.

1. Parenterální podávání nízkých dávek trypsinu horoshoizuchennymi spolu s terapeutickými vlastnostmi, inhibuje anaerobní energeticheskiyobmen neutrofily inhibuje migraci leukocytů proces ochagvospaleniya a tím brání šíření vospalitelnogoprotsessa.
2. Vliv malých dávek trypsinu zvyšuje antitripticheskuyu aktivnostgomogenata mozkových hemisfér krysy a má vyrazhennyylechebny protizánětlivý účinek.
3. Malé dávky kallikrein, jako nízkých dávkách trypsinu snizhayutaktivnost LDH a TPD v neutrofilních leukocytů a mozgakrys aktivita homogenátu mozku stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu který umožňuje kallikrein v malých dávkách, stejně jako trypsin, který se používá jako protizánětlivé činidlo.

Reference

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: Zařízení a metodyanaliza absorpce světla buněk. - Leningrad. Science, 1979.- 259 s.
2. Baumhakl U.S. Fodemar, Kreychova H. enzym ostryhi chronických zánětlivých procesů v knize: systémová enzymoterapie: výzkumu a klinické praxi. Upraveno K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - Mnichov. - Praha. - 1994. - S. 27-30.
3. Borisova MA, Ovcharenko NI, lázně AS Některé supravitalnyesposoby cytochemické Stanovení aktivity sukcinátdehydrogenázy laktatdegidrogenazyi krvinek // Lab. business. - 1975.- N 12. - S. 723-725.
4. Borisova MA, Ovcharenko NI Shpak SI, a kol. Supravitalnyesposoby cytochemické stanovení aktivity alfa-glitserofosfatdegidrogenazyi glukóza-6-fosfát dehydrogenázy v leukocytech perifericheskoykrovi // Lab. business. - 1983. - N 9. - pp 8-10.
5. VF Veselov, VA Protsenko Účinek inhibitorů proteolytických enzymů uux na vychytávání kyslíku mozkové tkáně krys a eeantitripticheskuyu aktivity // Ukr. Biochem. Zh. - 1981. -N 4. - pp 106-108.
6. Wolf, M., K. Léčba Ransberg enzymy. - Moskva: Mir, 1976.- 233 p.
7. Dittmar DF Adnexitis v knize: Systémová enzymoterapie: Studie-niyai klinické praxe. Editoval K. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - Mnichov. - Praha. - 1994. - S. 35-36.
8. E. Pierce Histochemistry Theoretical and Applied. Moskva: Inostr.liter, 1962.- 962 p ..
9. Fedorov NA Normální krvetvorby a jeho regulace. - Moskva: Medicine, 1976. - 543 s.
10. Shabadash AL Cytologické a Cytochemické predstavleniyao bariérové ​​mechanismy v buňkách. Proceedings of the setkání v knize: Histo-gematicheskiebarery. - Moskva: Nauka, 1961. - P. 381-394.
11. Hamberg U. Vlivy na kininového systému proteolýzou inplasma // Proc. Roy. Sol. - London, 1969. - V. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkiss R. D. Mikrochemických reakce resalting v staimingof polysacharidových struktur v pevných přípravcích yissue // Arch. Biochem. - 1948. - V.16. - P. 131 do 141.
13. Kaplow L. a histochemické postup pro lokalizaci s evacuatingleucocyte zásadité phasphatase činnost v nátěrech krevní dřeně // krve. - 1955. - V.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka F. Ústní enzimes - nový přístup k cfncer tritment // fórum. - Med. - Verl. - Ges. - 1996. -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol F. aceton fixace pro cytochemicaldemonstration z dehidrogenase v krvi a kostní dřeni ctlls // Nature.- 1960. -V.1.- S. 85-86.
16. Sokolova A. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke a kol. (Eds.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller stát a Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Mnichov. - Německo. - 1996.