MRNA se podílí na syntéze protilátky. Metody studia mRNA

V současné době, dva přístupy - chemické a imunochemické. První z nich je založena chemická frakcionace mRNA izolované z buněk, produkujících imunoglobuliny. Hlavní kroky jsou: výběr mislomnyh buněčných nebo mikrosomálních membránově vázaných polyribosomes (Stavnezer EA, 1971- Milstein a e 1972 ....) - extrakci RNA z nich za podmínek, které jim brání degradatsiyu- gradientu hustoty RNA frakcionace saharozy- výběr frakce odpovídající velikosti čištění zamýšlené mRNA ribozomální RNA na sloupci oligo ((1T) - nebo poly (U), celulózy (nebo sepharose), pouze bohatý zpoždění adennlovymi báze mRNA (polyA mRPK) a biologický výzkum aktivita vyhrazený ip akcie.

V některých případech se další čištění mRNA přípravky Použité polnakrplamidnom gelová elektroforéza v přítomnosti 99% formamidu (Farace e. a., 1976- Matthyssens s. a., 1976). U těchto nebo jiných variant výše popsaného schématu, které se používají u převážné většiny vědců. Výtěžek individuální polyA mRNA je typicky 0,01% z množství RNA zavedeného (Brownlee např. A., 1973). Výsledkem je, že v současné době přidělena NZ plasmacytomy MOPC 70E, MOPC 21, MOPC 41 několik mRNA kódující jak H a L řetězce. Čistota většiny těchto léčiv není vyšší než 40-60%.

Pouze jedna skupina autoři v poslední době se podařilo způsobem pro získání mRNA o více než 90% čistotou (Matthyssens e. a., 1976). To není překvapivé. Použitá metoda je založena jednak na separaci molekul RNA podle jejich molekulové hmotnosti a za druhé, na oddělení populace napojena obsahujících RNA zbaven z něj.

Samozřejmě, že mohou buňky představují počet mRNA s podobnými vlastnostmi, které nejsou spojené s imunoglobuliny. Všechny tyto nevyhnutelně kontaminovat RNA přípravky jednotlivých imunoglobulinu RNA. Je zřejmé, že by bylo buď větší nebo menší, v závislosti na relativní podíl imunoglobulinu syntetizovaného buňkami těchto nečistot.

Proto je pro izolace mRNA myelomů, syntézu protilátek, ve které 30-40% syntézy všech proteinů obecně, může být tato metoda ispolzovan- současně k izolaci mRNA kódující syntézu imunoglobulinu z normálních lymfatických tkání, zejména z vysoce heterogenní složení buněk na slezině to je jasně nevhodné.

e-mail perspektiva, Z našeho pohledu se jedná o imunochemické přístup k řešení tohoto problému. Její výhoda spočívá v tom, že již první krok frakcionace zahrnuje přísně specifický výběr jednotlivých polyribosomes s použitím protilátek proti proteinu syntetizovaného těmito polyribosomes. Existují tři varianty této metody. Původ - depozice polyribosomes protilátky k proteinu syntetizovaného v přítomnosti nosiče, tedy stejného proteinu (koprecipitační) .... (Delovitch a e, 1972- Laskov, Mitelman, 1975).

Za druhé - zpracování polyribosomes protilátky proti proteinu syntetizovaného jimi a vysrážením výsledný komplex antisérum protilátek (nepřímý precipitace) (Schechtcr, 1973, 1974a). A třetí - extrakční jednotlivé polyribosomes přes immunosorbents obsahující kovalentně nebo nekovalentně spojen protilátka syntetizovány na polyribosomes proteinu (Sidorov a kol, 1973- Sidorova s, 1974- Ľubimová et al, 1975, ...).. Z takto získané jednotlivé polyribosomes tak či onak polysomal RNA byla extrahována a mRNA odstraní průchodem směsi přes kolonu s oligo- nebo poly (U) celulózy. Použití imunochemickou přístupu podařilo získat mRNA preparáty přibližně 95% čistotu.