Překlad mRNA. Vlastnosti translace mRNA syntetizované protilátky

biologická aktivita mRNA izolované přípravky hodnoceny na svou schopnost syntetizovat za polypeptidových řetězců buněk souvisejících. Definování syntetický peptid konkrétní hodnotu, pokud jde o všechny nově syntetizovány, ale také může stanovení čistoty přípravku mRNA. Předpokladem je v tomto případě je použití proteinu značkování není žádné jednotlivé aminokyseliny, ale směsi alespoň 10 aminokyselin a radioaktivní chemikálie analytické metody s vysokým rozlišením (např., Dvojrozměrný peptidové mapování).

Pro translaci mRNA Bezbuněčné systémy používají tři druhy Krebs ascites hepatomu (Swan ea, 1972- Schechter, 1973 ..). králičích retikulocytů (Stavnezer, Huang, Mach 1971- e. a., 1973- Cowan e. a., 1976) a pšenice sazenice (Schechter, Burstein, 1976- Storb, Marvin, 1976). Nejpohodlnější, zdá se, že je poslední systém. Výtěžek značeného prekurzoru v něm je 0,1 pmol nebo 2,6 ng až 0,007 jednotek zavedených A2vo mRNA (Schechter, Burstein, 1976).

Vzhledem k tomu, že v této fázi výzvu popsány Výzkum je studovat potenciální translační schopnost mRNA a bezbuněčný systém, rostlin a zvířat v zásadě chovají v tomto ohledu stejné (Schechter, Burstein, 1976), stupeň vhodnosti a výhody systému samozřejmě závisí na následujících tří parametrů: velikost endogenního proteinu syntéza (čím nižší, tím lepší), dostupnost a jednoduchost požadovaných složek a množství mRNA, která musí být v systému pro získání spolehlivé zkoumány fúzní protein.

Video: Broadcast proces plastické výměnou

analog bezbuněčný systém někdy slouží jako žabích vajíček. Bylo prokázáno (Smith např. A., 1973), že zavedení do oocytů v mRNA kódující imunoglobulinových řetězců., Vede k syntéze těchto řetězů. Tato metoda je však složitější a vyžaduje značné množství mRNA.

Video: Přednáška 3. transkripce, translace

Většina experimentů nesena vysílání se mRNA, které kódují syntézu L-řetězcem (L-mRNA), neboť jejich separace je mnohem jednodušší, než izolace mRNA kódující syntézu H-řetězce (H-mRNA). Získané translační produkty mRNA kódující myelomu imunoglobuliny L-řetězce vedla k neočekávanému výsledku. Bylo zjištěno, že mRNA v bezbuněčných systémech kódování syntézu polypeptidů (prekursor) větší velikosti, než je zralý L-řetězec. Vytvoření prvního těžkého produktu pod působením 13S mRNA plasmacytomy MOPC 41 buněk popsaných Swann et al (Swan e a 1972)., Působením 10-14S mRNA z buněk plasmacytomy MOPC 21 -. Milstein et al (Milstein a f,. 1972). Molekulová hmotnost výsledného produktu byla větší než molekulová hmotnost příslušných L- řetězců (1500), z nichž bylo zjištěno, že že obsahuje 15 další aminokyselinové zbytky.

jako při přidání do bezbuněčném systému 355-formyl-tRNA jako jediným zdrojem označí 355-methionyl zjištěný v těžké složky, se dospělo k závěru, že alespoň část z těchto dodatečných aminokyselin umístěných na NH2-koitse molekuly L-řetězec (u eukaryot syntéza polypeptidových řetězců začíná začlenění methioninu) , Později syntéza údaje prekurzoru bylo potvrzeno v experimentech s mRNA "kódující syntézu L-obvody SIDS 70E (Toncgawa, Baldi, 1973), MPC" (Storb, Marvin, 1976), MOPC 41 (Mach ea, 1973), MOPC 321 ( Schechter, Burstein, 1976), MOPC 63 (Schechter e. a., 1976) a L-řetězce MOPC 104E (Burstein e. a., 1976).