Hybridizace mRNA a DNA protilátek. Lokalizace v- a geny v genomu imunoglobulinů

Při pokusech na hybridizace DNA různé mRNA a, obzvláště brzy obvykle získává dvoufázovou křivku s přechodovou oblastí v jednom regionu a druhá nízká - ve vysokých hodnotách Cot4l.

Použití pro útlaku hybridizace neznačeného mRNA, kódující L-řetězec homologní nebo heterologní C-oblastí již umožněno zjistit, že vysoké hodnoty kvůli hybridizace Cotih C genu, a že počet těchto genů nepřesahuje dvě - čtyři na haploidní genom. Přítomnost pole s nízkými hodnotami coth výzkumníky část považovat za důkaz významného počtu „zárodečných» V-genů. Avšak zvýšení čistoty mRNA přípravků a použití mRNA fragmentů, obsahující a polyA sekvence ukázala, že V-geny jsou také jedinečný, a které jsou uvedeny v genomu v množství nejvýše dvě nebo tři kopie v posledních letech.

Vezměme si příklad dat Hybridizační experimenty na mRNA, kódující syntézu lambda-L-řetězce myšího myelomu MOPC 104E s DNA z jater myshn (Matthyssens e. a., 1976). Na základě údajů o primární struktury V-oblastí všech v současné době zkoumány myší řetězce lambda (18 vzorků), rozdělených do sedmi podskupin. Pokud se pro každou V oblast je speciální V-genu, musí být detekován 7 V-geny v myším genomu. Ve skutečnosti jejich počet nemůže být menší než 145 (v tomto stavu je pravděpodobnost detekce sedmi různých podskupin ve studii celkem 18 vzorků se zvýší na 90% - při 50% pravděpodobnosti počtu V-genu musí být minimálně 25). hybridizace byla stanovena z křivky, že V-gen pro L-řetězce MOPC 104E se opakuje do genomu ne více než 2 až 3 krát. Ve stejné době, stupeň homologie dvou mRNA kódující syntézu dvou řetězců lambda, dokonce patří do dvou odlišných podskupin (MOPC 104E a NOR 2020), velmi velké. Extrapolace tyto údaje ke zbytku mRNA kódující řetězce lambda, lze dospět k závěru, že u této podobnosti mezi V-domény těchto řetězů L-mRNA MOPC 104E by mít gnbridizovatsya se všemi z nich, a proto hodnoty Cot by musel být podstatně nižší, než je definováno v experiment (čím více opakování, tím nižší je hodnota Cot ,,,). Tyto údaje naznačují, tedy proti přítomnosti v genomu velkého počtu V-geny, a tedy ve prospěch somatickou mutací jako primární faktor, poskytování různých protilátek (imunoglobulinů).

Mělo by však být poznamenáno, že Způsob hybridizace To je poměrně složitá a zdá se, že nedovolí, aby jasně interpretaci výsledků. Tak na rozdíl od pokusů popsaných výše, za použití cDNA do V- a C-domény v samostatně (cDNA a kDPKs) bylo zjištěno, Hybridizace kDNKu vysokou specificitu k mRNA (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Bylo zjištěno, že zatímco kDNKs stejně hybridizuje se všemi mRNA kódující typ kappa L-řetězce kDNKu reaguje pouze s kappa homologní mRNA. To znamená, že počet V-genů je určena hybridizací může být podceňována.

Ve stejné době, přičemž tento způsob hybridizace Ukázalo se, že velmi užitečná pro studium lokalizace V- a C-genů buněčného genomu. V poslední době, tato metoda byla schopna prokázat somatické reorganizaci genů kódujících V- a C-oblast imunoglobulinu. Ukázalo se, že v embryonálním myším genomu V- a C-gsny oddělí, zatímco v nádoru (plazmové nit MOPC 321, NOR 2020), které se nacházejí v blízkosti (fúzovány).

křivky mRNA hybridizující s DNA, odvozený od jaterních buněk a myelomu, byly téměř totožné. To znamená, že v buňkách produkujících imunoglobuliny, neexistuje žádná amplifikace genů, které je kódují.

Proto v současné době nalezeno, genom, který má 2 nebo 3 z genu kódujícího V oblast lambda řetězců, 2 nebo 3 genu pro V-oblasti řetězce kappa, a 2-4 genu kódujícího C oblast L-řetězce.

Za prvé, je zde Sloučenina V-a C-geny, pak tento kus DNA a 200-450 nepřeložené nukleotidy transkribována do mRNA, která po spojení s koncem 200 3`-polyA nukleotidu transportován do cytoplazmy, a je obsažen v polyribosomes, který kóduje syntézu prekurzorů polypeptidových řetězců imunoglobulinů.

Po odštěpení prekurzoru ekstrapeptidov (A možná před) začne montáž imunoglobulinových molekul, jejich přenos do mikrosomálních váčků a buď sekreci, nebo inkorporace do buněčné membrány.