Obsah Oční-glutamová kyselina ve vlhké komory u pacientů s primární glaukomu s otevřeným úhlem

Mnoho autorů glutamát omítky neurotoxiceffect na gangliové buňky sítnice. Je možné, že glutamicacid zvýšení koncentrace v očních tkáních s primárním otevřeným angleglaucoma (POAG), hraje důležitou roli v optickém nervu glaucomaatrophy patogenezi.

Komorová 10 pacientů s POAG byly pořízeny během cataractextraction a vyšetřeny. Množství kyseliny glutamové weredetermined chromatografickou metodou.

koncentrace kyseliny glutamové v komorové kontroly groupwas 28,6 ± 1,6 mkg / ml a ve skupině s POAG - 84,9 ± 28,7 mkg / ml.The rozdíl nebyl statisticky spolehlivý. Proto je atendency na glutamovou kyselinu zvýšení koncentrace v očích withPOAG.

PAnaly výzkum poslednihlet významně ovlivní prezentaci patogenezi zrakového nervu glaukomatoznoyatrofii - glaukomové optické neuropatie.

Bylo zjištěno, že charakteristika je projevem neuropatie glaukomatoznoyopticheskoy apoptózy - smrt ganglionu kletoksetchatki. Quigley [6], se domnívá, že poškozený může vsledstvievysokogo IOP axon gangliových buněk sítnice nenese dostatochnoyinformatsii, což vede k aktivaci mechanismu přirozeného gibelikletki. Možná, že tyto procesy jsou aktivovány nedostatochnostyukrovotoka cév v oku při zvýšené IOP. Ukázalo se chtoodnovremenno s tím existuje významné zvýšení kyseliny soderzhaniyaglutaminovoy (glutamát), ve sklivci pacientů pervichnoyotkrytougolnoy glaukom (POAG). Glutamát je hlavní neyromediatoromTsNS a sítnice. Zároveň se zvyšuje glutamatavyshe fyziologické úrovně koncentrace v sítnici způsobuje blokádu mezhneyronalnoyperedachi nervové impulsy a v kombinaci se selektivními apoptozomganglioznyh buněk sítnice v důsledku neurotoxické účinky glutamátu [5]. Brooks D.E. a kol. [7] nalézt v psích očí s glaukomem eksperimentalnovyzvannoy zvýšený obsah vitreální glutamátu, tryptofan, a nízkým obsahem glycinu ve srovnání s kontrolem.Po Podle autorů, vysoká koncentrace glutamátu je toxický dlyagangliev retinální ischemie mechanismus dokazuje poruchy vyskytující se v buňkách sítnice.

Samotná myšlenka neurotoxické působení glutamátu na nervnuyutkan zejména gangliové buňky sítnice, zaimstvovanaiz neurologické praxi. Neurologů 20 let znacheniebolshim dávají koncentrace vysílače ve vývoji takových onemocnění, jako je Alzheimerova choroba, roztroušená skleróza, demence, amiotroficheskiybokovoy skleróza a další [4]. Zvýšené hladiny glutamatav sklivce pacientů s glaukomem, smrt ganglion kletoksetchatki pod jeho vlivem v pokusech na krysách nechá E.B.Dreyer et al. [6] naznačuje, že mechanismus jejich místě a gibeliimeet POAG. Nicméně, příčina intracelulárním vypuskaglutamata není zcela jasné. E.B. Dreyer a kol. [6] věří, že možná vysoký nitrooční tlak způsobuje vyhoduglutamata do intracelulárního prostoru, indukci buněčné smrti, která je toxická pro gangliových buněk. Druhá pravděpodobné prichinoygibeli buňky, podle autorů, je selhání enzymových systémů odpovědných za zničení neurotransmiteru z synapse po vyhodaego. Obtížnost potvrzující tyto názory zaklyuchaetsyav, že je velmi obtížné ověřit fakta o „živé“ oko však nepochybné, že velkou koncentrací gutamata toksichnydlya nervovou tkáň.

Vzhledem k výše uvedenému je cílem naší studie bylo obnaruzhenieglutamata u pacientů s POAG.

Materiály a metody

Experimentální skupina sestávala z 10 pacientů s POAG (6 mužů, 4 ženy, průměrný věk - 74 let), kteří zabiralaskamernaya vlhkosti během extrakapsulární extrakci kataraktys antiglaukomatoznyh složky. 8 pacientů se vyvinula stadieyPOUG 2 s daleko pokročilé. Kontrolní skupinu tvořilo bolnyeso senilní katarakta - 14 pacientů (11 mužů a 3 ženy, průměrný věk - 68 let). Mezi hlavní a kontrolní skupiny bylisopostavimy věk a somatická onemocnění.

Základem metody popsané Bode a dal Giri metody kolichestvennogoopredeleniya deriváty aminokyselin ve formě mědi s ningidridinomposle jejich chromatografickým dělením na papíře v této modifikaci [1].

1. Příprava vzorků pro analýzu. Objem vzorků kamernoyzhidkosti 0,1-0,2 ml se naváží na analytických vahách, a odpaří se do sucha na vodní lázni při 40 ° C v mikrotitračních destičkách s použitím skla plovoucí stativ. Suchý zbytek se rozpustí v 0,05 mldistillirovannoy vodě.

2. Získání rozměrové chromatogramů zhidkostiglaza komora. 20 l získaného roztoku v dávkách po 5 I s pomocí automatické pipety se nanese na chromatografickou bumagumarki „rychle“ velikosti 2 x 27 cm. Způsob chromatografie provodyatniskhodyaschim dvakrát, nejprve v jednom směru smesirastvoriteley I, potom dvakrát směsí II. Směs I: n-butilovyyspirt, ledová kyselina octová, destilovaná voda (4: 1: 5). Směs II: n-butylalkoholu, ledové kyseliny octové, distillirovannayavoda (40: 15: 5). Po každém předání bumaguvysushivayut rozpouštědla na vzduchu a poté se umístí do chromatografické rozpouštědlové kameru.Vremya průchodu v jednom směru 7 hodin. Vysushennuyuhromatogrammu ponoří na několik sekund do 0,5% roztoku ningidrinav acetonem, vysuší se, aby se stal jasnější po den poetomuopredelenie kvantifikaci aminokyselin během několika minut na vzduchu při teplotě 50 ° C po dobu vývoj amino okraski.Pyatna ipodogrevayut 10 minut v peci, aby se další provoditna den.

3. Kvantitativní stanovení kyseliny glutamové v kamernoyzhidkosti oka. Červené skvrny odpovídající glutaminovoykislote jsou vyříznuty, rozřeže na malé kousky a umístí se do mikrozkumavky obsahující 0,25 ml alkoholického roztoku síranu měďnatého. Fioletovayaokraska stává oranžovo-červené obrazovaniyamednogo výsledného aminoderivát s ninhydrinem. extrakce Prodolzhayutv po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Intensivnostokraski měřeno na photoelectrocolorimeter Humalyzer 2000 pridline vlnové délce 505 nm, v microcuvettes nabumagu proti kontrolní vzorek. Výpočty založené na obsahu aminokyselin se provádí kalibrovochnomugrafiku získané ze standardních roztoků kyseliny glutamové.

4. Konstrukce kalibrační křivky. Gotovyatrastvory glutamová kyselina 0,001 M, 0,00075 M, 0,0005 M, 0,000375M, 0,00025 M. V článku je aplikováno na 20 ul řešení. Proizvodyatpo vzorec pro výpočet:

K = (C x 5 x 10^-2) / V

A - koncentrace kyseliny glutamové v vlhkosti komoře (ug / ml), C - obsah kyseliny glutamové nalézt na kalibrovochnomugrafiku (ug / ml) - V - objem vzorku (ml).

Výsledky a diskuse

obsah glutamátu vlhkosti v komoře kontrolnoygruppe byla 28,6 ± 1,6 ug / ml, s POAG - 84,9 ± 28,7 mikrogramů / ml (rozdíl není statisticky významný, p>0,05).

I když nejsou získány a statisticky významné rozdíly vsoderzhanii pacientů POAG glutamátu a věk katarakta odnakoimeetsya jasný trend směrem k vyšší koncentraci vlhkosti neyromediatorav komory POAG pacientů. U 5 z 10 pacientů s POAG soderzhanieglutamata byl vlhkosti komoře výrazně vyšší než v kontrolnoygruppe a v rozmezí od 37,6 pg / ml do 260.3 mikrogramů / ml.

U pacientů s nejvyšší koncentrací katarakty stařeckých pacientů glutaminovoykisloty byla jen 33 mg / ml.

Účast některých neurotransmiterů v nařízení oftalmotonusapokazano v dílech A. Myagkova [2,3], který dokázal, vliyanieopioidnyh peptidy ke zvýšení nitroočního tlaku, působící elektricheskimikolebaniyami a chemické podněty na amygdaloid kompleks.V výsledků získaných dat nemůže souhlasit s gipotezoyusileniya apoptózy gangliových buněk sítnice v POAG vsledstvienakopleniya kyselin v něm glutamová. Nicméně, toto gipotezatrebuet další studium.

Studie ukázaly poprvé v komoře glutaminovuyukislotu vlhkosti u pacientů s POAG. Obsah glutamatau pacienty Poag než v kontrolní skupině.

1. Lékařská laboratorní technika a diagnostika: technologie Meditsinskielaboratornye. Odkazem na 2 objemy / ED. A.M.Karpischenko // stanovení mikrometodou volných aminokyselin v syvorotkekrovi pomocí papírové chromatografie. V.2. - St. Petersburg, "Intermedika", 1999 - S. 106-109

2. Měkké AV Vliv propíchnutí oční vlivy způsobené elektrickým a chemickým stimulace mindalevidnogokompleksa: Avoref. diss. Na soisk. vědci. krokem. cand. med. nauk.- Kazan, 1997-1921.

3. Soft AV Účast opioidních peptidů v centrální tlaku regulyatsiivnutriglaznogo a hydrodynamických očí // Proc. Dokladov7sezda ophthalmologists Rusko. - M., 2000.- S.175-176.

4. Plyahin IV Biochemická základ prodloužena kletochnoysmerti. // Mezi meziregionální sbírky vědecké. Práce / Biochemie narubezhe XXI století. - 2000.- Ryazan. - S.173-177.

5. Shamshinova AM Zueva MV, Tsapenko IV, Jakovlev AA Neyrofiziologicheskieosobennosti sítnice a možné klinické elektroretinografii .// Vestn. Oftalmol. - 1996.- №2.- S.52-55.

6. Výskyt glaukomu v dokumentu // slackinc.com), oční chirurgie News International Edition, 15 prosinec 1996

7. Vitreousbody koncentrace glutamátu u psů s glaukomem / Brooks D. E., G. A. Garcia, Dreyer E.B. vůbec // Am. J. Vet. Res. - 1997.- Vol.58, N8.- P.864-867