Test trombinu generace

Tato metodika byla navržena britští vědci v roce 1953, aby posoudila stav systému hemostáze u hemofilie. Je třeba poznamenat, že navrhovaná metoda v originále bylo velmi daleko k dokonalosti, takže po dlouhou dobu, že není dána vážnou pozornost. Druhý způsob porodu přežil díky Hernker Conrada, který učinil řadu vylepšení v rámci postupu pro analýzu v 90. letech minulého století. Nejdůležitější změna Hernker K. a kol. bylo použití flyuoro- a chromogenní substráty pro detekci tvorby trombinu, čímž se výrazně zvýšila reprodukovatelnost způsobu. V tomto provedení, je způsob podle trombinu vznikajícího v průběhu reakce ničí peptidový substrát, který způsobuje uvolnění fluoroforu molekuly. Změna intenzity emise je detekována fluorometru v pravidelných intervalech.

Principem metody

Test je založen na udržování rychlosti hydrolýzy peptidové vazby fluorogenního substrátu specifického pro trombin. Stanovení substrátu výskytu zlomenin fluorometru se provádí v jamkách 96-jamkové destičky, ve kterém byla směs inkubována PRP vzorku s koagulační aktivátoru. Jako použití aktivátoru rekombinantního tkáňového faktoru činidlo a chlorid vápenatý a standardizovat a zlepšit rychlost koagulace v testovacím systému se přidají fosfolipidy. Studium kinetiky tvorby trombinu nám umožňuje odhadnout rovnováhu prokoagulační a antikoagulační mechanismy.

Reakční činidla a zařízení

• Rekombinantní faktor lidských tkání (1 pmol).
• Specifické trombinu fluorogenní substrát.
• Pufr roztok obsahující chlorid vápenatý.
• Kalibrátor s aktivitou lidského trombinu 580 nmol.
• Fluorometr.

Krevní vzorky pro výzkum

Jako ukázkový záznamové thromboelastogram používat BTP. Řada studií k účtu pro přispění destiček v tvorby trombinu je vhodné použít plazmy bohaté na krevní destičky. Tento test je vysoce citlivý na vady a má předem analytické fázi studie.

Video: přednáška 29 - Zkušební metody generace

výkon technika

vyšetřovacího řízení se provádí v souladu s návodem k použitém zařízení a algoritmu počítačový program, který vypočítá dynamiku hlavních ukazatelů tvorby trombinu.

Vyhodnocení výsledků studie

Fluorogenní substrát specifický pro trombin, takže změna intenzity luminiscence po přidání aktivátoru koagulace úměrnou rychlosti tvorby tohoto klíčového koagulační enzym.

Po kalibraci standardního množství trombinu fluorometru umožňuje zkonstruovat křivky vzniku trombinu. Studie hodnotila zpoždění tvorby trombinu (lag time), maximální množství trombinu (Peak trombinu), doba do dosažení maximální trombinu (ttPeak), stejně jako endogenní trombinový potenciál (ETP).

Interpretace výsledků průzkumu

Vzhledem k tomu, koagulační faktor je klíčový enzym v koagulační hemostázy, trombin zkouška generace je cenným ukazatelem integrální srážení krve.

Výsledky zkoušek jsou závislé na způsobu aktivace koncentrace aktivátoru koagulace, a mnoho dalších faktorů, takže se měnící podmínky technika umožňuje přizpůsobit ji detekovat různé vady hemostatického systému. To znamená, že přídavek thrombomodulinu v testovacím systému, pomáhá identifikovat hyperkoagulovatelné posuny v pozadí leydenovskoy mutacemi. Studium vzniku trombinu v plazmě bohaté na destičky umožňuje detekovat dysfunkci destiček hemostázi Glantsmana trombastenií, Bernard-Soulier syndrom a další.

Nejčastěji používaným aktivace koagulace BTP tkáňového faktoru, který umožňuje vyhodnocení stavu koagulace. Tento výkon u pacientů s časem hemofilii a další koagulopatie opatření Lag prodlouží, a ETP a Peak trombinu snížena. Intenzita těchto změn v těchto pacientů závisí na aktivitě koagulačních faktorů VIII a IX.

Příčiny chyb

Chyby Preanalytická fáze studie, ve Vol. H. špatném dávkování citrátu na odběr žilní krve.

• Vady odstřeďování při získání PRP vzorků.
• Kontakt s heparinem studovali krev z žilního katétru.
• Hemolýza.

Další analytické techniky

V současné době vyvinuli další analytické techniky, které jsou schopny vizualizaci koagulační proces, jako je například metoda záznamu růstu prostorové sraženiny a Tromboelastografie. Všechny tyto techniky vizualizovat srážení krve a je schopen vypočítat integrální koagulačních parametrů, ale jejich diagnostická specificita je stále nízká.