Diagnóza steroidních hormonů. metody

Video: Moderní metody diagnostiky a léčby onemocnění jater

Pro přesné měření malých koncentrace steroidních hormonů a jejich metabolity metoda imunotest s kompetitivní inhibice imunoprecipitace nebo radioimunotest (RIA), která byla poprvé popsána Berson a Yalow 1960 .. Avšak další vývoj Tato technika vědců se potýkají s obtížemi. Za prvé, steroidy, neimunogenní a mají podobnou strukturu - cyklopentan-hapten jádro s nepatrnými změnami, což činí obtížným produkci specifických protilátek.

steroidy To může být imunogenní, se k nim připojit hapten nosný protein, a hladiny protilátek může zvýšit preimunizace hapteny. Nicméně steroidní část, ke které je konjugovaný protein má významný vliv na specificitu produkovaných protilátek, Protilátky generované během konjugace hovězího sérového albuminu v poloze 19 vykazují vyšší specifičnost ve srovnání s ustanoveními 3 nebo 17. pro přesnější interpretace klinické nutné mít k dispozici údaje o zkřížené reaktivitě každé protilátky vybrané pro tuto analýzu.
většina firmy - výrobci činidel poskytují údaje o jejich zkřížená reaktivita protilátek, ale nejsou vždy spolehlivé a mělo by být prověřeno, že laboratoř, která bude provádět analýzu.

Za druhé, vysoce afinitní vazba proteiny, nacházejícím se v séru, jako SHBG, soutěžit s protilátkami, a tím vytvářet hluk pro stanovení počtu molekul steroidů pomocí RIA. To vede k obtížím pro přímé měření a vyžaduje předchozí extrakci steroidu s organickými rozpouštědly, a často se chromatografické separaci. Ve stejné době, některé chemické látky, jako je například 8-anilinonaftalensulfonat, jsou schopné inhibovat vazbu steroidních proteiny, což umožňuje měření koncentrace steroidu přímo bez předchozího extrakce.

Video: Moderní neškodné metody diagnostiky slintavky a páteř ortopedicheskoym centrum „Julianna“

přímá analýza To trvá trochu času a lze automatizovat. V komerčně dostupných automatizovaných jednotek pro stanovení koncentrace estradiolu, progesteron a testosteron, které se používají v mnoha laboratořích. Tyto testy jsou však vyznačují nízkou citlivostí, a pro stanovení minimální koncentrace - nízká spolehlivost. V tomto ohledu se nedoporučuje používat při stanovení velmi malých koncentrací hormonů, jako je estradiol u dětí a mužů (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

problém mohou být řešeny pomocí extrakce séra hexan (objemový poměr 3: 2), za kterým následuje jeho sušení a snížení hladiny bessteroidnoy, který se pak podrobí analýze na automatickém přístroji.

přihláška plynová chromatografie v kombinaci s hmotnostní spektrometrií (GC / MS) překonává mnoho z nedostatků imunotestu a je považován za spolehlivější a přesnější metoda. Nicméně, GC / MS se provádí v několika krocích, včetně extrakce rozpouštědlem, chromatografická separace, a chemické výkladu, který předchází instrumentální analýzy, a citlivost na GC / MS je často nižší než u některých druhů imunotestu. V poslední době se tato technika je přemístěn pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC / TMS), vyznačující se vyšší citlivostí a výkonu ve srovnání s GC / MS.

Nyní tento nový technologie považován za měřítko. LC / TMS byl použit pro současné měření hladiny estradiolu a estronu v lidské krevní plazmy bez zkřížené reaktivity. Tyto techniky lze doporučit jako reference a používá se pro normalizaci a schválení imunologických studií, které poskytují potřebné klinické potřeby pro jednoduchost a vysokou propustností.