Imunoglobulin reaktivita. Metoda spin značeného hapteny

Hsia a Malý (Hsia, Malá, 1973) zkoumali interakci dva spin-značený hapteny - DNP hydrazon derivát N-1-oxyl-2,2,5,5-tetramethyl--3-pyrrolidinonu (I) a M-1- (oxy-2,2,5,5-tetramethyl-3-methylamino) 2 4-dinitrobenzen (II) se dvěma mislomnymi IgA - MOPC 315 a 460 jako metoda EPR, a ke snížení kvantového výtěžku fluorescence proteinu.

Zjištěno, že vázání hapteny I a II, protein MOPC 315 N-O-skupina, v obou případech jsou silně imobilizovány stav, ale dva typy imobilizované složky jsou pozorovány v ESR spektru sloučeniny obecného vzorce II na rozdíl od rozsahu sloučenin vzorce I. Při navázání na protein MOPC 460 volného otáčení N-O skupina sloučeniny obecného vzorce I také značně omezeno, zatímco na skupině sloučeniny rotace-N-O II vázání na tento protein má malý vliv.

Nicméně, soudě podle toho, V blízkosti snížení kvantového výtěžku fluorescence po navázání proteinových hapteny a termodynamiky studie tohoto procesu spin-značený, afinita sloučenin vzorce I a proteinů MOPC 315 a 460 II mírně lišit. V důsledku toho se stupeň imobilizace N-O skupina spin-značený hapten ne ve všech případech pevnost charakterizuje komplex.

Podle autorů, rozdíly v imobilizace Sloučeniny obecného vzorce I a II mohou být uplatněny ze dvou důvodů: 1) ligandy se vážou k různým částem konformačně tuhou aktivní místo, 2) je aktivní konformace je stabilizována místo v různé míře v závislosti na rozdílech ve struktuře ligandů.

v jiných Zkoumali jsme příčiny, což vzhled dva typy imobilizované složky v ESR spektru proteinu MOPC 315. Komplex II Ukázalo se, že to je kvůli dvou formách enantomernymi spin-značený hapten II. N-O skupina tvoří ligand s příznakem méně hydrofobní mikroprostředí, a druhý - více hydrofobní, což má za následek odlišné polohy imobilizované složce na ose intenzity magnetického pole. Vázací oddělené enantomernyh formy (spin-značený aminy - DNP), protein MOPC 315 (což vede k objevení se pouze jeden typ součásti.

Metoda spin značeného hapteny

Substituce spin značeného hapteny v aktivních míst protilátek homologní hapten E byly použity Leutom a Členové (Leute např. a., 1972) pro stanovení koncentrace morfinu v testovacím roztoku. Tato metoda používá účinek silný nárůst výšky EPR čar spektra spin-značeného morfinu v jeho přechodu od imobilizovaném stavu k volnému v důsledku posunutí aktivního centra. Výška úzké čáry disinhibited EPR charakteristiky spektra v tomto případě koncentrace morfinu v testovaném roztoku.

Dolní mez citlivosti tento způsob-10 7M morfin (0,03 mg / ml). Dále, tento přístup byl vyvinut (Montgomery např. A., 1975) a byl použit pro určení koncentrace počtu léků v séru. Ukázalo se, že do 100 (krát citlivější než konvenční chemickou metodou a vlastnil vysokou specifitu. U jednoho stanovení celkem 50 ul séra.

Hsia a jeho spolupracovníci používají komplex DNF - methylen (N-1-oxyl-2,2,5,5, tetramethyl-3-methyl-aminopyrrolidin-2,4-dinitrobenzen) s myelomovými IgA (MOPC 315) jako modelový systém pro studium zkříženou reaktivitu proteinu s ohledem na DFT a jeho analogy. Na množství volných, aktivních center vzdálených od spin-značený hapten posuzovala intenzity EPR složek spektra vysokopolyyuy. Kvantitativní odhady získané touto metodou jsou v dobré shodě s výsledky rovnovážné dialýzy. Navrhovaný způsob je velmi slibné v imunochemických studiích.
tyto závěry o struktuře aktivního místa protilátek může být provedeno na základě získaných dat.