Kritéria kvality imunologických testovacích hormony

Obě metody by měly být konkrétní, citlivé, přesné a mají dobrou reprodukovatelnost. Kromě toho by měla být vyvinuta metoda analýzy, aby bylo možné měřit hladiny hormonů v séru a krvi a plazmě, a někdy i v moči a slin (v případě, například, steroidy). Dalším důležitým kritériem - minimální počet a maximální jednoduchost provozu, které mají být provedeny laboratorní personál. Všechna tato kritéria byly navrženy do posledního detailu do konce roku 1960. Vzhledem k tomu budeme učinit několik poznámek a komentářů.

specifičnost

Jedná se o nejdůležitější ukazatel kvality jakýmkoliv způsobem imunoanalýzy. Specifičnost může být určena jako schopnost metody pro detekci pouze konkrétní vzorek (analytu) látku, a nezjistí žádné cizí látky, a to i velmi podobnou strukturou s ním. Jinými slovy, specifita - schopnost metody, aby minimální počet falešných poplachů. Specifita imunotestu je určena především specificita primárních protilátek. Mělo by být zejména tehdy, pokud hormony pokusy se stejnými nebo podobnými antigenních determinant. Například adenogipofizarnye hormonů FSH, LH, TSH a hCG jsou složeny ze dvou polypeptidových řetězců - calamus, kde řetězec jsou identické. Pokud analýza některého z těchto hormonů, jako FSH, jako primární protilátky použity nizkospetsifichnuyu polyklonální antisérum, většina z protilátek se váže na a-řetězci všech čtyř hormonů, takže výsledek měření je falešně pozitivní. Tento jev se nazývá cross-reaktivita. Křížová reaktivita je pozorována při měření prolaktinu, který patří do stejné rodiny s růstovým hormonem a placentální laktogenu (všechny tyto hormony jsou velmi podobné N-terminální aminokyselinová sekvence).

Specifičnost polyklonálních primárních protilátek může být zvýšena imunoadsorpcí na sloupci antiséra s příslušnými antigeny. Tento přístup byl široce používán před příchodem hybridomové technologie. V okamžiku, jako primární protilátka je téměř vždy používá vysoce specifických monoklonálních protilátek, které se váží na antigenní determinanty jsou specifické pro tento hormon.

Specifičnost imunochemické analýzy závisí nejen na vlastnostech primární protilátkou, ale i z mnoha jiných, které se někdy nepředvídatelné faktory. Zejména specificita může být snížena v důsledku zkřížené reakce s primárními protilátkami, nějaké neznámé složky v testovaném vzorku séra nebo plazmy. Jsou chvíle, kdy některé změny syrovátkové bílkoviny konformačních a protože toto se stane antigenní podobnost s analyzované hormonu. A konečně, sérové ​​komponenty mohou být zavedeny do aktivních míst primární protilátky a snížit specifičnost jejich schopnost vázat se na antigen. Imunotest technologie, existuje celá řada způsobů, jak zabránit křížové reakce, nicméně, možné předvídat všechny překvapení.

Video: žít zdravě! Léčba mužské neplodnosti

Většina imunochemické testovací systémy určené k měření hladiny hormonů v některých lidských tělních tekutinách (sérum, plazma, moč, sliny). V souladu s tím, specifičnost testovacích systémů založena na těchto biologických tekutin. Pokud se takové testovací systémy použit pro in vitro analýzu hormonů, jako je například po inkubaci endokrinních buněk v pufru Krebs Ringer nebo nebo v každém kultivačním médiu, je třeba zkontrolovat, zda jejich specifičnost zejména v takových „abnormální“ podmínek.

citlivost

Citlivost imunochemickou testu může být definován jako minimální koncentrace látky, která může být měřena tímto způsobem. Pro posouzení citlivosti za použití standardního vzorku se známou koncentrací hormonu nebo jiného antigenu. Tento vzorek se připraví sériovým ředěním vzorků s klesající koncentrací hormonů. To znamená, že citlivost zkušebního systému je přímo úměrná stupni zředění standardního vzorku, se kterou je možné získat přesný výsledek měření. Citlivost imunochemickou testovacího systému je závislá především na afinitě primárními protilátkami, které se používají v něm. Kromě toho citlivost závisí na typu imunotestu, na kterém je testovací systém navržen. Obecně platí, že citlivé testovací systémy založené na RIA je vyšší, než je analýza testovací systémy založené immunohemilyuminestsentnogo a ELISA.

Video: Co je to jídlo? 5 kritérií. Syrové potraviny, fruktoedenie

Pro posouzení citlivosti za použití standardního vzorku se známou koncentrací hormonu nebo jiného antigenu. Tento vzorek se připraví sériovým ředěním vzorků s klesající koncentrací hormonů. To znamená, že citlivost zkušebního systému je přímo úměrná stupni zředění standardního vzorku, se kterou je možné získat přesný výsledek měření.

Citlivost imunochemickou zkušebního systému by měla být taková, že může být použit pro měření hladiny hormonů se nachází nejen v normálním rozmezí koncentrací, ale také pod tímto rozmezím. Proto testovací systémy návrháři snažit dosáhnout citlivosti mezi 3. a 5. percentilu nebo norem v rozsahu dvou až tří standardních odchylek od spodní hranici normálu. Například rozsah normální koncentrace LH u žen je 1,1-77 IU / l (2,3 162 pmol / l). V důsledku toho je citlivost zkušebního systému pro měření LH by měla být asi 0,4 IU / l (0,84 pmol / l). Tato vysoká citlivost je zvláště důležité, když je nutné měřit nízké koncentrace LH, zejména pro diferenciální diagnostiku primární menstruace. V této situaci, hladina LH pod 10 IU / l ukazují, sekundární (hypogonadotropním hypogonadismem), zatímco vyšší hodnoty - primárním hypogonadismem. Imunochemické zkušební systém musí mít vysokou citlivost a v těch případech, kdy chcete zachytit sebemenší změnu koncentrace hormonu. Nejčastěji je tento problém vzniká při plánování a hodnocení účinnosti hormonální substituční terapii. Například, při léčbě hypotyreózy dávky levothyroxinu vybraných měření TSH. Hladina TTG se pohybuje mezi 0,4 a 4 mIU / l (2,9-29 pmol / l). zatímco moderní testovací systémy pro měření TSH mají citlivost lepší než 0,01 mU / l (0,073 pmol / l). Opakovaná měření vysoce citlivé TSH umožňují endokrinolog velmi přesně nastavit dávku levothyroxinu.

Citlivost testovacího systému je závislá především na afinitě primárními protilátkami, které se používají v něm. Kromě toho citlivost závisí na typu imunotestu, na který je vyvinut testovací systém (analýza RIA immunohemilyuminestsentny, ELISA). Citlivost analýzy RIA a immunohemilyuminestsentnogo obecně vyšší, než je citlivost testu ELISA, jak je v prvních dvou způsobů imunochemické reakce probíhají v kapalné fázi, přičemž antigenní determinanty hormonů staly přístupné primární protilátky. Nicméně, pro účely výzkumu a jsou vyrobeny vysoce citlivý testovací systém založený na ELISA.

přesnost

Tento stupeň blízkost výsledku měření koncentrace hormonu k jeho skutečné hodnoty. Přesnost závisí na citlivosti a systematické chyby v metodě: čím větší je citlivost a tím menší je chyba, tím vyšší je přesnost. Přesnost imunochemických testovacích systémů byla hodnocena pomocí měření koncentrace hormonů v standardních vzorků.

reprodukovatelnost

Tato schopnost imunochemické testovací metoda dává podobné výsledky možné opakované měření koncentrace hormonu ve stejném vzorku za různých podmínek (v různých časech, v různých laboratořích). Posoudit reprodukovatelnost byla použita jako standardní vzorků získaných od pacientů a vzorků. Pro dosažení vysoké reprodukovatelnosti, laboratoř musí být plynulý v práci s touto metodou testovacího systému a měření za standardních podmínek (při stejné teplotě, stejná doba trvání reakce).

Video: Agresivita Technology - Práce s automatickým biochemickém analyzátoru ChemWell-T

Specifičnost, citlivost a reprodukovatelnost je povinné, jsou uvedeny v pokynech a záznamových listů pro všechny komerčně dostupné imunochemická testovacích systémů a imunochemické Autoanalyzer. Nicméně, každá laboratoř by měla nezávisle posoudit všechny tyto nastavení, zvláště reprodukovatelnosti, ve skutečných provozních podmínkách.