Stabilizace imunoglobulinů hapteny. Závislost konformace protilátky teploty

Existují údaje z různých metody, směřující ke zvýšení stability protilátky a jejich Fab fragmentů vyplývající z komplexaci s hapteny. Například přídavek nich zvyšuje stabilitu hapten molekul denatiruyuschemu působení guanidin hydrochloridu (Cathou, Werner, 1970) a pro působení chymotrypsinu (Grossberg např. A., 1965).

IgM protilátky také stabilizovat specifické hapteny s ohledem na proteolýzou subtilisinu a chymotrypsinu (Ashman, Metzger, 1971). Bylo prokázáno, že snížení citlivosti k útoku proteázami IgM zcela z důvodu změny vlastností Fab fragmentů. Podle našeho modelu, se posune rovnováha hapten komponent A a B Fab-fragment vlevo.

Proto, aby vysvětlil citované stačí, aby uvedené výsledky, že volná energie je kompaktnější konformer Spodní volná energie konformeru B (t. j. A-konformer stabilnější než B). Pokud ano, pak ke zvýšení stability proteinů, nezávisí na tom, jak se odpovídající rovnováha posun způsobil.

Ve skutečnosti se ukázalo, že posun Rovnováha doleva spin-značené dimery lehkých řetězců, simulující strukturu Fab-podjednotek působením 1,2 M NaCl a 0,75 M (NH 4) AS04 zvyšuje jejich stabilitu v závislosti na teplotě. Podobný posun v rovnováze mezi A a B konformerů způsobuje další rozrušující strukturu proteinu a jeho hydratace shell činidla, jako je dodecylsulfát sodný a teploty.

závislost konformační stav IgG detekovaná jinými metodami teploty. Například, G. Troitskii a spolupracovníci (1971) a J. F. Kiryuhin a spolupracovníci (1972) od optické rotační disperze pozorovány reverzibilní změny konformace přechodovou teplotu závislých na pH, od 27 ° do 38 °. Následně se ukázalo, že v neutrální oblasti pH přechodové teploty nezávisí na isoelektrický bod IgG.

Nicméně, když pH, vzdálený od izoelektrického bodu, když je molekula IgG stane dostatečně velký vlastní náboj, teplota konformační přechody jsou zcela chybí (Troitsky e. a., 1973). V VP Zavyalova a personál (Zavyalov např. A., 1975) provedla mnohostranné výzkum myelom konformace proteinu v závislosti na pH a teploty od optické rotační disperze, cirkulární dichroismus spektroskopie znepokojující, elektrochemické jodace a diferenční skenovací kalorimetrie.

Bylo zjištěno, že když pH se změnilo z 6,0 na 6,5 dostupnost chromoforní skupiny rozpouštědel snižuje. To může mít v důsledku změn počtu nabitých skupin v proteinu a snižuje intermolekulární elektrostatické síly odporu. Podobný jev - stínící část tyrosin a tryptofan zbytky (pH 7,35- 0,01 M fosfátového pufru) -nablyudali se zvyšující se teplotou od 25 do 35 ° C. K tomu dochází po navázání na hapten dinitrofenyl homologní králičí protilátky (IgG).

Tyto výsledky lze považovat za údaj o tom, že oteplení a formování specifických komplexů s hapteny zvyšuje kompaktnost, který je v souladu s celou řadou prací citovaných výše.