Struktura aktivních center protilátek. Studium aktivních míst imunoglobulinů

Hsia a Piette použití monovalentní a bivalentní spin-značený hapteny DMF Zkoumali jsme hloubku a různorodost aktivních míst králičí anti-DNP protilátky. Zkoumali závislost korelace spin-značené monovalentní DFT-hapten vázaný na aktivní místo protilátek z Ha + D 1Ds, V - délka haptenu, d - je vzdálenost mezi haptenem a štítku, který může být změněn zvýšením uhlovodíkový řetězec mezi nimi.

Pokud změníte Ha + d od 10 do 12 A Autoři pozorovat prudký pokles korelace časového razítka, která se pak změnila jen málo. Tento pokles je proto, že Ha + d ve výše uvedeném rozmezí přesahuje hloubku aktivního místa a na etiketě, přičemž se stává volně otáčet. Z toho vyplývá, že hloubka aktivních míst je 10-12 A. Podobné výsledky byly získány při experimentech s bivalentních hapteny.

Když přidal se k protilátka bivalentní hapten v přebytku sledovaném ESR spektra je silně imobilizován tvorbou dimerů nebo trimerů protilátek. Minimální délka bivalentní haptenu, přičemž schopnost vázat dvě molekuly protilátek ještě zůstal, se rovnala 21 A. Je zřejmé, že minimální hloubka aktivním centru je 10,5 A.

rozměry protilátky aktivní centra, Zdá se, že závisí jen málo na druhové specifičnosti. Tak, použitím stejného způsobu, konzistentní zvýšení vzdálenosti mezi DFT a odstřeďování značkou, se ukázalo, že hloubka aktivních center kuřecích anti-DFT protilátek a IgA mislomnyh myší MOPC 315, který má vysokou afinitu k DNP je 10 ± 1 A. Další skupina autorů zkoumání centrum Fv-fragmsnta protein MOPC struktury 315 pomocí spin-značený hapteny, přišla ke stejnému výsledku.

To znamená, že informace aktivního hloubka protilátky center, získané odstředivým štítku, jsou v dobré shodě s rentgenové analýzy.

Spin-značený hapteny byly použity (Willan e a, 1977). Pro srovnávací studii aktivních míst těchto velikostech mislomnyh IgA anti-DNP činnosti: MOPC 315, 460 a SIDS XRPC 25. Analýza imunitních komplexů EPR spektra spin-značené DNP a některé jeho deriváty Vzhledem k těmto hapteny stereochemii vedly k těmto závěrům, Hloubka aktivních center tří identických IgA (11-12), ale existují rozdíly v příčných rozměrech center u vstupu.

Pro XRPC 25 Tento rozměr je 7,5X8 A pro MOPC 460>10X 11 X A „a SIDS 315B>8h11A. Všechny tři proteiny mají vazebná místa lantanndov La III a Gd III. Interakce mezi těmito míst a aktivních center. MOPC 160 a vzdálenost 315 mezi kovem a N-O skupina spin-značený hapten asi 10 A, a XRPC - 25-20 A.

Magnetická nukleární rezonance (-NMR), s vysokým rozlišením (270 MHz), byl aplikován do stejné skupiny autorů studovat na aktivní místo Fv-fragment MOPC (315 Dower např. A., 1977). Konkrétní výpočty možné určit geometrii aktivního místa ve spojení s haptenem DNP, která tvoří van der Waalsovy interakce se čtyřmi centrálními aromatických aminokyselin.

Bylo zjištěno, že tyto pásy ve spektru NMR, odpovídající fenylalaninu nebo tyrosinových zbytků, rozšířit v přítomnosti haptenu. Nejpravděpodobnější vysvětlení pro toto - pokles pohyblivosti odpovídající zbytky, které jsou schopny pohybovat s frekvencí asi 104 Hz.