ADAMTS13

Tak, v běžných podmínkách tato proteáza štěpí von Willebrandův faktor multimerů a vytváří normální a nízkou molekulovou hmotnost.

Nedostatek ADAMTS13 hraje důležitou roli v patogenezi trombotickou trombocytopenickou purpurou (Moshkovitsa syndrom), protože selhání tohoto metaloproteinázy velké multimery vWF jsou zodpovědné za neřízené tvorbě destiček mikroagregátů, blokování mikrocirkulaci. V posledních letech snížení ADAMTS13 nejen nalézt na mikroangiopatie syndromů, ale také u chronické glomerulonefritidy, sepse, jaterní cirhóza, DIC, a ještě mnohem více.

Principem metody

Princip metody (ELISA) na základě specifické vazby molekul ADAMTS13 protilátek na povrchu mikrotitrační destičky. Po odstranění látky, které nejsou vázané na mikrodestičky, inkubovány s enzymem značená protilátka (konjugát). Výsledkem je, že na povrchu, na kterém mikrodestiček přístupových protilátek značených enzymem komplexů ke stávajícím genu anti-protilátky. Přidáno po umytí 3,3`, 5,5`-tetra-metilbenzidin k vyhodnocení aktivity enzymu charakteristika barvicí zkušební směsi. Intenzita barvy je přímo úměrná aktivitě enzymu a podle toho, počet ADAMTS13 ve vzorku.

Video: TTP ADAMTS13

Reakční činidla a zařízení

• Mikrotitrační jamky potažené protilátkami proti ADAMTS13.
• Vzorek vyrovnávací paměti.
• Promývací pufr.
• Roztok chromogenu / substrátu (chromogen - tetrametylbenzidinu podkladu - peroxid vodíku).
• Stop Solution.
• Zařízení pro provedení ELISA (podložku, čtečku pro tablety a další.).

Distributor Diagnostická souprava činidel - CJSC "BIOHIMMAK".

Vzorky krve pro studium jako vzorek pro stanovení koncentrace ADAMTS13 BTP použití stabilizovaného citrátu sodného celé krve.

výkon technika

Posloupnost akcí laboratoř lékař při určování úrovně ADAMTS13 měli přísně dodržovat pokyny k sadě činidel. Kalibrátory doporučuje prozkoumat duplicitní definice.

Video: ADAMTS13 Teil 1

Výsledky vyhodnocení studie ke stanovení koncentrace ADAMTS13 je nezbytné pro vytvoření kalibrační křivky. Na kalibrační křivky ležel hodnotu absorbance získané měřením kalibračních vzorků. Poté je propojený bod se provádí kalibrační křivky pro stanovení koncentrace ADAMTS13 ( «point-to-point»). Obvykle je koncentrace ADAMTS13 je 50 až 140%.

Interpretace výsledků ADAMTS13 studie - metaloproteinázy štěpí von Willebrandova faktoru. Nízká koncentrace a / nebo sníženou aktivitu ADAMTS13 idiopatické příčiny trombotická trombocytopenická purpura (Moshkovitsa syndrom). Moshkovitsa syndrom charakterizovaný pěti hlavních klinických projevech: neurologické poruchy, dysfunkce ledvin, hemolytická anémie, trombocytopenie, horečka. Nemoc je obtížná, bez léčby patogeneticky bázi mortalita dosahuje 90%. Syndrom Moshkovitsa často vykazují pokles koncentrace ADAMTS13 méně než 10%. Avšak mnohem užitečnější pro diagnostiku této patologie je stanovení ADAMTS13 aktivity, jako v tomto případě, s výjimkou pro kvantitativní redukce této inhibice mohou být detekována metaloproteinázy autoprotilátky.

Mutace v genu řídící syntézu ADAMTS13, který je schopen určit časté relapsy trombotická trombocytopenická purpura. Klinické projevy vrozeným deficitem ADAMTS13 syndromu tzv Upshaw-Schulman (Upshaw-Schulman). V této úrovni syndrom ADAMTS13 je menší než 6,7%.

V době psaní monografií, bohužel, nejsou definovány jednoznačně rozlišujících vlastností trombotické trombocytopenické purpury a hemolytický uremický syndrom. Nicméně, většina expertů mají tendenci se domnívat, že hemolyticko-uremický syndrom, není pozorováno snížení ADAMTS13, takže tato hodnota je velmi významné pro diferenciální diagnostiku těchto život ohrožujících podmínkách.

Příčiny chyb

• Selhání teplotní režim ukládání činidlo.
• mycí Porušení postupy (v případě ručního promývání se promyje alespoň 4 krát).
• Smíchání činidla z různých šarží.
• Kondenzaci vlhkosti v jamkách (aby se zabránilo výskytu kondenzace by neměla být otevřena do obalu, dokud se ohřívá na teplotu místnosti).

Další přídavek analytická technika činidel pro měření koncentrace ADAMTS13 existuje metoda pro stanovení aktivity metaloproteinázy. Nedostatek aktivity způsoben mutací nebo přítomnost autoprotilátek proti ADAMTS13.