Gen anomálie protrombinu 20210 g / a

V rodinách pacientů s trombóza zjištěna autosomálně dominantní dědičnosti F2: 20210 G / A.

V současné době spojena s touto genetickou anomálií s nadprodukcí protrombinu. Nicméně, i přes technické schopnosti určit zvýšené hladiny protrombinu, detekce tohoto onemocnění by měla být založena výhradně na PCR dat vysoké citlivosti a specifity PCR poskytují v oligonukleotidů in vitro syntetizuje komplementární k odpovídající části lidského genu protrombinu.

Principem metody

Pro identifikaci polymorfních alel v amplifikaci F2 genu s použitím příslušných částí genu pomocí PCR s následnou detekci amplifikačních produktů.

Reakční činidla a zařízení

• Pro určení anomálie F2: 20210 G / A se používá následující praymerypraymer 1 (dopředný primer) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nukleotidy 20035-20054) - Primer 2 (reverzní primer) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nukleotidy 20229- 20211).
• Kontrolní vzorky s divokou alelu a mutantní alely.
• Zesilovače a jiná zařízení k provádění PCR.

Vzorky krve pro studie pro výzkum materiálu může být jakýkoliv zdroj DNA, ale žilní krev je používán, který se do zkumavek obsahujících EDTA vzorky byly skladovány před zahájením studie, při teplotě 2 ... + 8 ° C po dobu až 24 hodin. Vzorky byly skladovány Long mohou být zmraženy při -40 ° C ..- 70 ° C

Izolace DNA z klinických vzorků materiálu se může provádět různými způsoby, například pomocí soupravy na bázi oxidu křemičitého, nastaví mikroodstředivce sloupce sady založené na extrakci fenol-chloroformem, a další.

výkon technika

Metoda je založena na oblasti vícenásobné kopírování volební DNA s použitím in vitro enzymu. Pokrok ve studii musí splňovat vybraná zařízení a postup analýzy PCR (gelová elektroforéza, blesk a podobně.).

Vyhodnocení výsledků studie

Vyhodnocení výsledků se provádí způsobem, který umožňuje vizualizovat oligonukleotidu polymorfní střídání. DNA fragmenty byly stanoveny s použitím různých fluorescenčních barviv, které se specificky vážou na DNA.

Interpretace výsledků průzkumu

Pro mnoho nosičů polymorfismu charakteristické odlišným lokalizace trombózy, riziku, které v přítomnosti těhotenství, užívání orální antikoncepce podstatně zvyšuje, v pooperačním období, a další. Neúplné penetrace genu, v tomto ohledu, někteří dopravci nemají historii trombotických poruch. V přítomnosti tohoto polymorfismu varianty homozygotní věku prvního dílu je menší, a frekvence a závažnost trombózy výše. Detekce heterozygotní frekvence anomálií, podle literatury, je v populaci asi 1-2%. V přítomnosti F2: 20210 G / A hladina protrombinu u pacientů s asi 1,5 až 2 krát vyšší, než je obvyklé.

Zjištění, že anomálie protrombinového genu u pacientů s recidivující trombózy doložit umožňuje prodloužené antikoagulační profylaxi. Takový výzkum pomáhá identifikovat těhotných žen se zvýšeným rizikem trombózy.

Příčiny chyb

• Chyby pre-analytické fáze studie (v porušení podmínek skladování nebo způsob dopravy biomateriálů nukleových kyselin lze rozebrat, což způsobuje falešně negativní na výsledky heparin může inhibovat reakci PCR, takže krevní vzorky nesmí být provedena ve zkumavkách obsahujících antikoagulant).
• Kontaminace vzorků cizí biologický materiál.
• Porušení zásad územního laboratoře pro molekulárně genetických studií.
• Odmítnutí studovat negativní kontrolu.
• Odmítnutí provést opětovnou analýzu pozitivních vzorků.
• Selhání izolace DNA technik.
• Specifičnost a citlivost PCR primerů v podstatě závisí na struktuře, takže použití primerů od různých výrobců může způsobit odlišné výsledky.

Jiné analytické PCR Technology Různá provedení jsou považovány za spolehlivé laboratorní postupy, které mohou poskytnout vysokou citlivost, specifitu a reprodukovatelnost. Navzdory existenci technických možností pro identifikaci zvýšené hladiny protrombinu, diagnóza trombofilie by měla být založena výhradně na použití PCR variant.